LA EXPRESIÓN DE LA NUCLEOPROTEÍNA DEL VIRUS JUNÍN DISMINUYE EL CONTENIDO TOTAL DE LIPID DROPLETS CELULARES

VÁZQUEZ CA; HAYASHI J; LEON K; PAULO MOREIRA, J; TOMAR S; OTT M; GARCÍA CC; CORDO SM

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2019); 2019

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Introducción y Objetivos: Las gotas lipídicas o (LD) son organelas actualmente descriptas como relevantes en la multiplicación de diferentes virus, tales como los virus dengue, hepatitis C y polio, aunque inicialmente se las consideró simples sitios de almacenamiento de lípidos. El virus Junín (JUNV) es el agente causal de la Fiebre Hemorrágica Argentina. Si bien existe una vacuna, todavía no hay una quimioterapia disponible para tratar esta enfermedad. JUNV es un virus envuelto que está conformado por cuatro proteínas: la nucleoproteína (N), asociada al genoma de ARN simple cadena, la ARN polimerasa (L), la proteína de matriz (Z) y la glicoproteína (G). En trabajos anteriores hemos observado que la modulación farmacológica de la biogénesis de los LD afecta los niveles de replicación viral. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la multiplicación viral sobre el número y tamaño de LD.Materiales y Métodos: Para ello, se trabajó con las líneas celulares de hepatoma humano HepG2 y Huh.7, JUNV cepa IV4454 o vectores lentivirales que codifican para N, Z o G, fusionados a la secuencia Flag. Los cultivos celulares fueron infectados o transducidos por 48 horas. En el caso de las muestras infectadas, se realizó una inmunomarcación utilizando un anticuerpo monoclonal contra N. Para las muestras transducidas, se utilizó un anticuerpo anti-Flag. Los LD se marcaron con la sonda o alternativamente con anti-perilipina 2, la proteína marcadora de LD. Mediante microscopía confocal de alta resolución se tomaron microfotografías de campos aleatorios. Utilizando imágenes en distintos planos focales y por medio del software se realizaron reconstrucciones tridimensionales de cada célula y sus componentes. Se calculó el número y volumen de los LDpor célula y se analizó la localización de las proteínas virales.Resultados: En el presente trabajo demostramos que JUNV provoca una disminución significativa en el número de LD en aquellas células infectadas respecto de las no infectadas. Mediante la expresión independiente de las proteínas virales observamos que N es capaz de producir este efecto en el contenido de LD, en ausencia del resto de los componentes virales. En cambio, la expresión de Z no generó diferencias significativas respecto del control.Conclusiones: Estos resultados nos permiten concluir que N juega un rol importante en la modulación de los LD durante la infección, aunque todavía no puede descartarse la relevancia de otros componentes virales. Este rol no sería dependiente de una interacción directa con esta estructura. Los factores que pudieran mediar la interacción entre N y los LDs están actualmente siendo estudiados para determinar la relevancia funcional de la disminución de los LD en células infectadas con JUNV