Localización de la nucleoproteína de virus Junín y efecto de su expresión sobre el contenido total de Lipid Droplets celulares

VÁZQUEZ CA; HAYASHI J; LEON K; MOREIRA JP; TOMAR S; OTT M; GARCÍA CC; CORDO SM

Vaquerías, Córdoba

Conferencia; XXXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2019

Sociedad Argentina de Virología

Las gotas lipídicas olipid droplets (LD) son organelas actualmente descriptas como relevantes en la multiplicación de diferentes virus, tales como los virus dengue y polio, aunque inicialmente se las consideró simples sitios de almacenamiento de lípidos. La Fiebre Hemorrágica Argentina está causada por el virus Junín (JUNV). Si bien existe una vacuna contra este virus, todavía no hay una quimioterapia disponible para tratar la enfermedad. JUNV es un virus envuelto que está conformado por cuatro proteínas: la nucleoproteína (N), asociada al genoma de ARN simple cadena, la ARN polimerasa (L), la proteína de matriz (Z) y la glicoproteína (G). En trabajos anteriores hemos observado que la modulación farmacológica de la biogénesis de los LD afecta los niveles de replicación viral. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto dela expresión de las proteínas virales sobre el número y tamaño de LD.Para ello, se trabajó con las líneas celulares de hepatoma humano HepG2 y Huh.7, JUNV cepa IV4454 o vectores lentivirales que codifican para N o Z, fusionados a la secuencia Flag. Los cultivos celulares fueron infectados o transducidos por 48 horas. Las muestras infectadas se inmunomarcaron utilizando anticuerpos monoclonales contra N. Para las muestras transducidas, se utilizó un anticuerpo anti-Flag. Los LD se marcaron con la sonda LipidTox o con anti-perilipina 2, la proteína marcadora de LD. Mediante microscopía confocal de alta resolución se tomaron microfotografías de campos aleatorios. Utilizando imágenes en distintos planos focales y por medio de los softwares Imaris e ImageJ se realizaron reconstrucciones tridimensionales de cada célula y sus componentes. Se calculó el número y volumen de los LD por célula y se analizó la localización de las proteínasvirales.En el presente trabajo demostramos que la infeccióncon JUNV provoca una disminución significativa en elnúmero de LD en aquellas células infectadas respectode las no infectadas. Mediante la expresiónindependiente de las proteínas virales observamos queN es capaz de producir este efecto en el contenido deLD, en ausencia del resto de los componentes virales.En cambio, la expresión de Z no generó diferenciassignificativas respecto del control.Por otro lado, al analizar la localización de las proteínasvirales observamos que una fracción N de JUNV estáasociada a la superficie de los LD. Este fenotipo podríaestar relacionado con la sublocalización celular dealguno de los productos de clivaje de N.Estos resultados nos permiten concluir que N juega unrol importante en la modulación de los LD durante lainfección, aunque todavía no puede descartarse larelevancia de otros componentes virales. Además, esposible que esto se deba a una interacción directa de laproteína con los LD. Los factores que pudieran mediarla interacción entre N y el metabolismo de LDs estánsiendo estudiados para determinar la relevancia funcional de la disminución de los LD en célulasinfectadas con JUNV