ESTUDIO DE LOS LIPID DROPLETS DURANTE LA INFECCIÓN CON EL ARENAVIRUS JUNÍN

VÁZQUEZ CA; PEÑA CÁRCAMO JR; GARCÍA C; CORDO SM

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Asociación Argentina de Microbiología

Los lipid droplets (LDs) son organelas constituidas por un núcleo de lípidos neutros, rodeado por una monocapa de fosfolípidos. En esta monocapa se insertan diferentes proteínas que confieren a los LDs diversos roles dentro del metabolismo celular. Por un lado, están involucrados en la respuesta inmune innata ya que en ellos se encuentran factores de restricción de la replicación viral. Por otro, los LDs están involucrados en la replicación de diversos virus, como dengue y hepatitis C.JUNV, perteneciente a la familia Arenaviridae, es el agente etiológico dela fiebre hemorrágica argentina. Nuestros trabajos anterioresdemostraron la participación del metabolismo de lípidos en la correctareplicación de JUNV, sugiriendo la importancia del estudio detallado delas estructuras lipídicas y su función en el ciclo de multiplicación del virus.Nuestro presente objetivo es estudiar el rol de los LDs en la replicaciónde JUNV. En este trabajo se evaluó el efecto de la modulación de los LDssobre la multiplicación viral.Se utilizaron las líneas celulares HepG2 (hepatocarcinoma humano) yA549 (carcinoma de pulmón humano). Para modular la morfogénesis delos LDs, se trataron durante 24 horas monocapas de células infectadas(MOI 1) con ácido oleico (AO) o el inhibidor de la síntesis de ácidos grasosC75. Las monocapas fueron fijadas y teñidas con Oil Red-O (ORO) parasu análisis por microscopía y los cambios inducidos por los tratamientosen la complejidad interna de las células fueron medidos por citometríade flujo. Finalmente se aislaron LDs provenientes de monocapasestimuladas con AO e infectadas con JUNV.Se pudo verificar mediante la tinción con ORO y el análisis por citometríade flujo que el tratamiento con AO y C75 estimuló e inhibió lamorfogénesis de LDs, respectivamente. Ensayos de inmunofluorescenciasugieren que en los cultivos infectados, el patrón de localización de lanucleoproteína viral se ve modificado por el tratamiento con AO y C75;no así, el de las glicoproteínas. Por otro lado se observó que en cultivosinfectados con JUNV hay una disminución en el número de LDs respectodel número de LDs en las células no infectadas. Finalmente, seestablecieron las condiciones de fraccionamiento subcelular quepermiten el enriquecimiento de los LDs en un gradiente de sacarosa. Lasfracciones obtenidas a partir de los cultivos infectados se estánanalizando por Western blot para determinar la presencia de lasproteínas virales.En conclusión, mediante el uso de técnicas que permiten el estudioespecífico de los LDs se demostró que la modulación de estas estructurasafectan la replicación de JUNV, así como el patrón de expresión de lanucleoproteína viral. Estos resultados sugieren la importancia delestudio de estas estructuras en el ciclo de multiplicación de losarenavirus.