Análisis de la expresión de la proteína prostaglandina-endoperóxido sintasa 2 (PTGS2) en cultivos infectados con virus Junín

GRAVANO, MB; VÁZQUEZ CA; CORDO, SM

Conferencia; XLII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2022

Sociedad Argentina de Virología

La prostaglandina-endoperóxido sintasa 2 (PTGS2) es una proteína de expresión inducible, clave en la biosíntesis de ácido araquidónico y prostaglandinas y responsable de la activación de vías inflamatorias y anti-apoptóticas. Virus como hepatitis C, hepatitis B, dengue y SARS-CoV-2 regulan la expresión de PTGS2. En estos casos el aumento de expresión contribuiría tanto a la replicación como a la patogénesis viral. Para los arenavirus un único trabajo reportó la regulación negativa de esta enzima por la cepa virulenta LCMVWE. Mientras que la cepa no virulenta LCMV-Arm indujo la expresión de PTGS2. Sin embargo, el estudio del rol de PTGS2 en la replicación de los arenavirus no ha sido abordado hasta el momento. El objetivo de este trabajo fue determinar si la infección con el arenavirus Junín (JUNV) produce un cambio en la expresión de PTGS2. Se utilizaron cultivos de la línea celular humana A549 infectados a una m.o.i=0.1. Se analizó por inmunofluorescencia indirecta la expresión de PTGS2 a distintos tiempos p.i. y en comparación con cultivos sininfectar. Se cuantificó el número de células infectadas y el número de células expresando PTGS2. A las 5 h p.i. el número de células PTGS2 (+) fue del 6%, alcanzando valores del 22% a las 24h p.i. Además, observamos que el patrón de expresión de esta enzima fue principalmente citoplasmático y puntillado en comparación con el patrón difuso observado al estimular la expresión de PTGS2 con PMA. Cuando se analizó la expresión relativa del mensajero de PTGS2por RT-PCR, se determinó un aumento de 2.25 veces a las 24 h p.i en cultivos infectados respecto del control. A tiempos más tardíos de infección (48-54h p.i.) observamos un aumento de la expresión de PTGS2 en células negativas para el antígeno viral pero adyacentes a las infectadas. Por otra parte, utilizamos Etoricoxib, un inhibidor selectivo de PTGS2, para investigar suefecto sobre la multiplicación de JUNV. Se determinó la viabilidad celular del cultivo A549 en presencia de 20 a 200 µM de la droga. Luego se trataron las células infectadas durante 24h con las mismas concentraciones y se cosecharon los sobrenadantes para cuantificar los niveles de producción viral. En estas condiciones y rango de tratamiento la viabilidad se mantuvo siempre por encima del 80%. Además, a la concentración máxima utilizada la inhibición selectiva de PTGS2 reduce la producción viral (UFP/ml) en un 70%. De estos resultados podemos concluir que la infección con JUNV induce la expresión de la enzima celular PTGS2 durante las primeras 24h. Para el mismo lapso de tiempo determinamos que la inhibición de la actividad de PTGS2 con Etoricoxib reduce la multiplicación viral. La inducción de PTGS2 parecería no ser sostenida ya que a tiempos más tardíos los cultivos infectados no presentan el mismo patrón de expresión.Más estudios deberán realizarse para corroborar la posible regulación bifásica de esta enzima celular y su significado biológico durante la replicación de JUNV y otros arenavirus.