PRODUCCIÓN DE LIPASAS DE PENICILLIUM RUBENS LBM081

ORTELLADO LAURA ESTER; VILLALBA LAURA LIDIA; ZAPATA PEDRO DARÍO; FONSECA MARÍA ISABEL

Posadas

Simposio; SAPROBIO 2021 6º Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2021

SAPROBIO

El empleo de enzimas en diversos sectores industriales está en auge, debido a que su capacidad catalítica ha sido superior a la de numerosos catalizadores químicos o la necesidad cada vez mayor de emplear métodos que sean menos perjudiciales al ambiente. Estas enzimas se han obtenido de distintas fuentes: plantas, animales y microorganismos. Siendo estos últimos los de mayor importancia. Las lipasas son una de las tantas enzimas que son muy demandas por diferentes industrias, lo que ha llevado a buscar nuevas fuentes de esta que puedan cubrir dicha demanda. Teniendo en cuenta este contexto actual, el objetivo del presente trabajo fue producir lipasas utilizando Penicillium rubens LBM 081 un aislamiento proveniente de la selva Paranaense.En primera instancia se partió de un medio de cultivo líquido compuesto por peptona 2 %, aceite de oliva 4 %, suplementado con una suspensión de esporas 1x 106, cultivado a una temperatura de 30°C y agitación constante a 140 rpm, en dos volúmenes diferentes de 100, 300 mL por duplicado.La actividad enzimática de las lipasas presente se cuantifico con el método de p-nitrofenol palmitato a 405 nm en los días 6, 10 y 16.Todos los resultados se analizaron con Statgraphics plus de Windows 5.1, Prisma 5.0. (ANOVA simple). También se analizó el perfil enzimático de ambos ensayos en un gel de poliacrilamida con duodecilsulfato sódico SDS-PAGE al 12% (p/v); la corrida electroforética se realizó durante 2 h, adicionando 1 g/L de SDS al buffer de corrida. Después de concluida la corrida electroforética, se eliminó el SDS de los geles sumergiéndolos en Triton X-100 al 2,5% a temperatura ambiente por 30 min. Los geles se lavaron brevemente en buffer fosfato 50 mM, pH 7,0 y se cubrieron con una solución de butirato de 4-metilumbeliferilo (MUF) 100 µMSe compararon los ensayos realizados y se observó que en 100 mL producía una actividad enzimática de 2782 U/mL a los 6 días de incubación. De la misma forma se evaluó la actividad enzimática lipasa del ensayo realizado a 300 mL en este caso se observó que la actividad enzimática decayó un 40% (1670 U/mL) a los 6 días mientras que al día 10 se observó que se incrementó la actividad llegando a 2086 U/mL quedando estable en días posteriores hasta el día 16 que se concluyó el ensayo. El análisis del zimograma reveló la presencia de una enzima lipasa en todos los ensayos con un peso aproximado de 42 Kda.Mediante el empleo de volúmenes diferentes se evidencio una buena capacidad en el mantenimiento de la producción de la enzima lipasa en el hongo Penicillium rubens LBM 081.