Caracterización de lipasas presentes en Penicillium sp. de la provincia de Misiones

ORTELLADO LAURA ESTER; VILLALBA LAURA LIDIA; ZAPATA PEDRO DARÍO; FONSECA MARÍA ISABEL

Posadas

Jornada; 1ras Jornadas Institucionales INBIOMIS : 10 años construyendo biotecnología; 2022

Instituto de Biotecnología Misiones. Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales. Universidad Nacional de Misiones

Grandes cantidades de aguas residuales (industriales, agrícolas y domésticas) son vertidas a las cuencas sin un tratamiento previo generando un exceso de contaminantes en las mismas. Es conocido que un exceso en lípidos causa serios problemas ambientales como la obstrucción de la línea de alcantarillado y la generación de una capa aceitosa en la superficie del agua que evita la penetración del oxígeno y la luz solar afectando la vida acuática. Los métodos de tratamiento físico-químico existentes para las aguas residuales ricas en lípidos son costosos, no son ecológicos y plantean un problema secundario de contaminación. El empleo de enzimas en diversos sectores industriales está en auge, debido a que su capacidad catalítica ha sido superior a la de numerosos catalizadores químicos o la necesidad cada vez mayor de emplear métodos que sean menos perjudiciales al ambiente. Estas enzimas se han obtenido de distintas fuentes: plantas, animales y microorganismos. Siendo estos últimos los de mayor importancia. La biorremediación mediada por lipasa (E.C. 3.1.1.3) microbiana presenta un enfoque alternativo atractivo para superar estos problemas. Teniendo en cuenta este contexto este trabajo se centró en la caracterización de lipasas producidas por aislamientos del género Penicillium de la provincia de Misiones. Para ello en primera instancia, se realizó un screening semicuantitativo utilizando métodos fluorométricos el cual permitió la selección de siete aislamientos del género Penicillium con capacidad lipolítica de manera rápida y eficiente. Estos fueron identificados a nivel de especie empleando herramientas moleculares. Posteriormente se evaluó la actividad lipasa en presencia de aceite de oliva eligiéndose a Penicillium rubens LBM 081 por presentar los mayores niveles de actividad lipasa. La actividad lipasa de P. rubens LBM 081, al igual que otras lipasas fúngicas, dependió en gran medida de las fuentes de carbono y de nitrógeno presentes en el medio. La máxima actividad enzimática (2780 U/mL) se logró cuando el hongo creció en el medio de cultivo optimizado suplementado con peptona 2%, aceite de oliva 4% y se inoculó con una concentración de esporas 1x106 e incubó a 30ºC y 140 rpm. P. rubens LBM 081 presentó una enzima de 42 kDa en el medio optimizado. La actividad óptima de la lipasa estuvo dentro del rango encontrado para la mayoría de las lipasas fúngicas, su termoestabilidad fue mayor a 30°C disminuyendo a temperaturas más elevadas probablemente por desnaturalización de la estructura enzimática. El pH óptimo de la lipasa de P. rubens LBM 081 también estuvo dentro del rango encontrado para las lipasas fúngicas de 7. El secretoma del medio optimizado de P. rubens LBM 081 presentó una expresión diferencial de las enzimas implicadas en degradar los compuestos lipídicos presentes en el medio y demostró un incrementó en la cantidad de enzimas lipolíticas secretadas.