Desarrollo de una cámara de extracción de compuestos intracelulares de tejidos de origen animal para la determinación de biomacadores

LUCAS A. SIQUEIRA; NICOLÁS CANCIO; GABRIEL M. EGGLY; JESSICA MOYANO; SOFIA STUPNIKI; ANA M. MARTINEZ; RODRIGO SANTOS; RICARDO ALEXANDRE CAVALCANTI DE LIMA; MARIO CESAR UGUILINO DE ARAUJO; MARCELO F. PISTONESI

Río Cuarto

Congreso; 9º Congreso Argentino Química Analítica; 2017

ASOCIACIÓN ARGENTINA DE QUÍMICOS ANALÍTICOS Y UNIVERSIDAD NACIONAL DE RÍO CUARTO. FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, FÍSICO-QUÍMICAS Y NATURALES

El empleo de bioindicadores y biomarcadores ha tomado gran importancia en los últimos años en programas de biovigilancia, como herramienta para evaluar el estado fisiológico y el estrés de organismos de diferentes niveles tròficos y promover la comprensión de los mecanismos por los cuales responden a los cambios ambientales [1]. En este trabajo se diseña una cámara de extracción (CE) para la obtención de homogenados de tejidos celulares de origen animal. Dicha CE se acoplará a un sistema Flow-Batch que permita la determinación de biomarcadores asociados a estrés por exposición a xenobióticos.La cámara de extracción está formada por un cilindro de vidrio (20 mm de diámetro interno y 40 mm de altura) cuya base es un piezoeléctrico cerámico circular (1,0 MHz), accionado por un driver (circuito de potencia), el cual es comandado por un sistema embebido (Arduino UNO) para controlar potencia, frecuencia y tiempo de activación. La homogeneización de tejidos y lisis celular de hígado de pollo, se realiza empleando una solución de buffer fosfato pH 7,00 a 25±02 ºC. Se evalúa la performance de la CE en la obtención de homogenados evitando la inactivación, desnaturalización y degradación enzimática durante la extracción. Para ello, se emplea un diseño de experimento que permita establecer las condiciones óptimas del proceso de lisis. Se utilizó el método de Taguchi con 4 factores y 3 niveles, con un arreglo ortogonal L9. Se estudió la concentración de Tritón X-100 (0-2 %v/v), potencia (60-100%), frecuencia (20-40 KHz) y tiempo (90- 270 s). Los resultados preliminares obtenidos indican que la frecuencia es un factor significativo respecto a la variable respuesta. Las condiciones óptimas seleccionadas son 60 % potencia, 30 KHz frecuencia, tiempo 270 s en ausencia de Tritón X-100.La cámara de extracción desarrollada es económica, portable, fácil de construir y permitió la obtención de homogenados celulares que facilitaría la determinación de biomarcadores.El empleo del dispositivo ultrasónico en la CE permite que el proceso sea completamente reproducible y linealmente escalable.