Hsp70 en la regulación de las subunidades Nox4/p22phox NAD(P)H-oxidasa y el citoesqueleto en células CMLV de SHR tratadas con Losartan

GIL LORENZO ANDREA; BOCANEGRA VICTORIA; RINALDI TOSSI MARTÍN; BENARDON MARÍA EUGENIA; CACCIAMANI VALERIA; GARRAMUÑO VALLÉS, PATRICIA

Buenos Aires

Congreso; Sociedad Argentina de Hipertensón Arterial; 2012

Hsp70 EN LA REGULACIÓN DE LAS SUBUNIDADES Nox4/p22phox NAD(P)H-OXIDASA Y EL CITOESQUELETO EN CÉLULAS CMLV DE SHR TRATADAS CON LOSARTAN. Gil Lorenzo AF, Bocanegra V, Rinaldi Tosi ME, Cacciamani VE, Benardon ME, Vallés P. Área de Fisiopatología, Facultad de Ciencias médicas, UNCuyo. IMBECU, CONICET. Mendoza. E-mail: andreafernandagillorenzo@gmail.com Introducción La expresión completa de la señalización de Angiotensina II (AII) en células de músculo liso vascular (CMLV) depende de la interacción dinámica del receptor AT1 (AT1R) con Caveolina-1 presente en la membrana lipídica y de la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) producidas a través del ensamblaje y activación del sistema NAD(P)H-oxidasa (1). El dominio catalítico de este complejo es homólogo de flavina, gp91phox (Nox2), Nox1, Nox3, Nox4, Nox5 y Duox 1 y 2. Nox4, una subunidad de este complejo, en VSMCs se asocia con las adhesiones focales ricas en Vinculina (2). Las enzimas Nox presentan diferentes mecanismos de regulación, el de Nox4 aún no es bien conocido, existe unión física de Nox4 con p22phox, pero se ignora si otras proteínas regulatorias se asocian a este complejo. El ensamblaje de complejos de macromoléculas a los sitios de adhesión en membranas durante la estimulación contráctil del tejido de músculo liso es necesario para la iniciación de la polimerización de los filamentos de Actina y la regulación de los complejos de adhesión que unen los filamentos de Actina a la matriz extracelular. Además de su participación en la estabilización de interacciones en las células y la matriz, las adhesiones focales intervienen en la transducción de señales de múltiples eventos celulares. AII activa numerosas moléculas de señalización, incluyendo MAP quinasas y pequeñas proteínas GTPasas, RhoA, Cdc42 y Rac (3). RhoA juega un rol prominente regulando la organización del citoesqueleto, promoviendo el ensamblaje de las adhesiones focales y las fibras de estrés de Actina. Asimismo se ha sugerido que ROS intervendría en la remodelación del citoesqueleto, la regulación positiva de Nox4 incrementando el engrosamiento de las fibras de estrés y modificando adhesiones focales. Las proteínas de golpe de calor (HSP) son chaperonas moleculares que participan en el correcto plegamiento y ensamblaje de proteínas recién sintetizadas y desnaturalizadas. Algunas de las HSP pueden expresarse en forma constitutiva, no obstante la mayoría son inducidas por estrés físico, metabólico o iónico (4). Se ha demostrado recientemente que participan en el transporte de proteínas a localizaciones intracelulares específicas. Existe evidencia experimental del rol de la proteína chaperona Hsp70 participando en el ensamblaje del citoesqueleto y de su interacción con proteínas de membrana. Objetivo Estudiar la participación de Hsp70 sobre la regulación de las subunidades Nox4 y p22phox del complejo NAD(P)H-oxidasa y la modulación del citoesqueleto en cultivo de CMLVs luego del tratamiento con Losartan. Modelo experimental Se trabajó con cultivos primarios de CMLVs obtenidas a partir de lecho vascular mesentérico (vasos de resistencia) de ratas macho de 8-10 semanas de edad, espontáneamente hipertensas (SHR) y controles normotensos WKY con un peso corporal en gr de 225.5±4.9 WKY vs 178.7±4.1 SHR, p