TRANSICIÓN ALCALINA DEL CITOCROMO c ADSORBIDO SOBRE COMPLEJOS BIOMIMÉTICOS

OVIEDO ROUCO, SANTIAGO; ÁLVAREZ PAGGI, DAMIÁN; CAPDEVILA, DAIANA A.; TÓRTORA, VERÓNICA; RADI, RAFAEL; MURGIDA, DANIEL H.

Buenos Aires

Congreso; XIX Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inrgánica; 2015

AAIFQ

El citocromo c (Cyt) es una proteína pequeña soluble, que funciona como transportador de electrones en la cadena respiratoria y participa además de los eventos tempranos de la apoptosis. En su forma nativa el hierro hémico se encuentra coordinado axialmente por una histidina (His18) y una metionina (Met80), constituyendo la forma redox activa. Sin embargo, el enlace Fe-Met80 es relativamente lábil. Se ha postulado que una coordinación alternativa del Fe hémico es la responsable de la función apoptótica de Cyt debida a la ganancia de actividad peroxidasa. El aumento de pH induce la denominada transición alcalina de Cyt (pKa = 9.3) que implica el reemplazo de la Met80 por un residuo de lisina (Lis72 o Lis79). La nitración de tirosinas es una de las modificaciones post-traduccionales más frecuentes del Cyt. Es sabido que la nitración en la Tyr74 produce una transición alcalina temprana (pKa = 7.1) la cual coincide con el pKa del proceso de deprotonación del grupo nitro otras presentes en el Cyt. En este trabajo se presenta el estudio de parámetros termodinámicos y cinéticos de la transición alcalina del Cyt nativo y de sus variantes nitradas adsorbidos sobre complejos biomiméticos con el objetivo de elucidar el mecanismo subyacente. Se estudiaron los cambios conformacionales y el cambio de estado de protonación de la nitro-Tyr a través de espectroscopía Raman resonante intensificada por superficie resuelta en el tiempo (TR-SERR) por excitación a 413 nm y 458 nm, respectivamente. Los experimentos se realizaron adsorbiendo la muestra proteica sobre electrodos de plata funcionalizados con monocapas auto ensambladas (SAMs) de alcanotioles ω-funcionalizados con carboxilatos e hidroxilos en proporción variable. Se determinó que sobre sustratos biomiméticos la transición alcalina sufre un cambio en su pKa dependiente de la carga superficial del electrodo. Sin embargo, los primeros resultados que la adsorción no afecta la velocidad de la transición del Cyt nativo.