Análisis funcional de las proteínas ribosomales L19 y S21 de tripanosomátidos.

JURI AYUB MAXIMILIANO; ZARATE JUAN; MANZUR JIMENA

Congreso; XXVI REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE PROTOZOOLOGÍA; 2013

Numerosas evidencias sugieren que el aparato traduccional de los tripanosomátidos presentamarcadas diferencias estructurales y funcionales con su contraparte en otros organismosmodelo como mamíferos y levaduras. En particular, los ribosomas de T. cruzi presentancomponentes estructurales únicos, tales como grandes inserciones dentro de las moléculasde ARN ribosomal. Por otro lado, el análisis in silico de proteínas ribosomales de T. cruzi reveló que dos de ellas (L19 y S21 de las subunidades 60S y 40S, respectivamente) poseen dominios C-terminal de gran tamaño (~160 aminoácidos) exclusivos de tripanosomátidos. La secuencia de dichas extensiones no permite inferir su posible función ya que en muchos casos consistenen secuencias altamente repetitivas, resultando por lo tanto especialmente interesantes. Esto nos llevó a preguntarnos si las secuencias C-terminales se encuentran presentes en el ribosoma maduro. Para ello clonamos, expresamos y purificamos L19 y S21 recombinantes y a partir de ellas generamos anticuerpos contra la porción N-terminal (que excluye la región específica de tripanosomátidos). Mediante western blot demostramos que ambas proteínas se encuentran completas (sin procesar) en el ribosoma maduro, generando el interrogante de la posible función de dichos dominios en la traducción. Ensayos de silenciamiento génico en T. brucei demostraron que L19 es necesaria para la viabilidad. Ensayos similares están siendo llevados a cabo para S21. Actualmente estamos llevando a cabo experimentos de sobreexpresión constitutiva en T. cruzi y expresión inducible en T. brucei para determinar si las extensiones C-terminales son necesarias para la incorporación de estas proteínas en el ribosoma.