Desarrollo de Sondas para analizar la expresión de receptores de Angiotensina II

MANZUR MJ, ALVAREZ SE, CIUFFO GM

Universidad Nacional de San Luis, Argentina

Jornada; 2° Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular; 2006

Desarrollo de Sondas para Analizar la Expresión de Receptores de Angiotensina II Manzur, María J; Alvarez, Sergio; Ciuffo, Gladys. Bioquímica Avanzada. Fac. Qca, Bioqca y Fcia. UNSL. Ejército de los Andes 950 (5700) San Luis.  E-mail: mjmanzu@unsl.edu.ar     Angiotensina II ejerce su efecto fisiológico a través del binding a receptores de membrana, clasificados en base a sus características farmacológicas en receptores AT1 y AT2. La expresión de los receptores es altamente modulada durante el desarrollo sugiriendo un rol de Ang II en el crecimiento y la organogénesis. Por tanto, resulta de vital importancia poder estudiar el patrón de expresión de ambos receptores en diferentes estadíos del desarrollo mediante metodologías como Northern blot . Para ello se amplificaron ambos receptores de Ang II por PCR y los productos de amplificación, fueron purificados (Wizard, Promega), a fin de eliminar primers y proteínas. Los productos purificados fueron analizados mediante mapeo de restricción para corroborar su identidad, y a continuación fueron subclonados en el vector pGem-T-easy. La expansión del vector se llevó a cabo en la cepa de bacterias E.coli DH5a. El plásmido fue purificado y el producto extraído del vector mediante digestión con ER. Los fragmentos extraídos del gel fueron  purificados en una columna de afinidad. Por último se realizó marcación radiactiva por el método de random priming utilizando ATP aS35. Las sondas  fueron posteriormente utilizadas en ensayos de Northern, realizados con RNA obtenido de cerebelo de rata de diferentes edades y revelado por autorradiografía. Estos datos nos brindan información precisa sobre la localización de los receptores en los distintos tejidos en diferentes estadíos del desarrollo.