Desarrollo de protocolos de Retrotranscripción acoplada a Reacción en Cadena de la Polimerasa cuantitativa (RT-qPCR) abiertos y modulares para detección simultánea de virus respiratorios

CARRILLO ANGELES; BRAECKMAN CARLOS; MANZUR MARÍA JIMENA; JURI AYUB MAXIMILIANO

San Luis

Jornada; IV Jornadas de Bioquimicas y II Jornada de Tecnicos de la provincia de San Luis; 2022

Ministerio de Salud de la Provincia de San Luis

Desarrollo de protocolos de Retrotranscripción acoplada a Reacción en Cadena de la Polimerasa cuantitativa (RT-qPCR) abiertos y modulares para detección simultánea de virus respiratoriosCARRILLO Ángeles1, BRAECKMAN Carlos2, MANZUR Jimena1, JURI AYUB Maximiliano1 (*) 1 Laboratorio de Desarrollo de Diagnósticos Moleculares, Área Biología Molecular. FQByF. Universidad Nacional de San Luis. 2 Laboratorio BioMAv, San Luis.(*) Contacto: mjuriayub@hotmail.com La pandemia de enfermedad por coronavirus de 2019 (COVID 19) requirió de estrategias confiables y a la vez flexibles para hacer frente a la masiva demanda de detección molecular de coronavirus tipo 2 causante del síndrome respiratorio agudo severo (SARS Cov 2). En dicho período, en nuestro laboratorio se diseñaron, optimizaron y validaron diferentes estrategias de RT-qPCR para afrontar este desafío. En la actualidad, la exitosa campaña de vacunación ha permitido retomar las actividades sociales cotidianas en todos los ámbitos sin restricciones. Sin embargo, el SARS Cov 2 continúa circulando y a esto se suma el resurgimiento de los demás virus respiratorios. Por lo tanto, es deseable contar con herramientas simples que permitan emplear las mejoras en equipamiento y personal adquiridas durante la pandemia, a un costo razonable, aportando herramientas de uso diagnóstico y epidemiológico.Por esto, en nuestro laboratorio hemos modificado protocolos establecidos de RT-qPCR para detección de SARS Cov 2, Influenza A y Virus Sincitial Respiratorio (RSV), generando reacciones en formatos modulares que pueden ser adaptadas en diferentes combinaciones empleando RT-qPCR multiplex. Para ello, se obtuvieron sondas de hidrólisis con fluoróforos Texas Red (para SARS Cov2) y Hex (para Influenza) y control de calidad de muestra (RNasa P; Cy5). Se optimizó una reacción de RT-qPCR cuádruple que permite detectar simultáneamente SARS Cov 2, Influenza A y RSV, junto con el control endógeno que nos permite evaluar la calidad de muestra. Las reacciones fueron validadas mostrando una performance indistinguible del formato singleplex, amplificando los fragmentos específicos incluso en muestras que contenían ARN de los tres virus analizados. Actualmente trabajamos en la incorporación a esta reacción de la detección de Influenza B.