LIPASA HEPATICA EN PLASMA POST-HEPARINICO. ADAPTACION Y VALIDACION DE UN METODO

BERG, GABRIELA; GONZALES, ANA INES; HALPERIN, HAYDEE; SCHREIER, LAURA; WIKINSKI, REGINA

BUENOS AIRES, ARGENTINA

Congreso; 60 CONGRESO ARGENTINO DE BIOQUIMICA; 1996

ASOCIACION BIOQUIMICA ARGENTINA

La Lipasa Hepática (LH) es una enzima que se encuentra unida al endotelio capilar de los sinusoides hepáticos, y se libera a la circulación por la inyección endovenosa de heparina. Interviene como triglicérido-hidrolasa y fosfolipasa en el catabolismo de las lipoproteínas de densidad intermedia (IDL), LDL y HDL. Se encuentra sujeta a  control hormonal, su síntesis es estimulada por la ínsulina, hormonas tiroideas y andrógenos e inhibida por estrógenos. La determinación de su actividad se realiza en plasma luego de la inyección endovenosa de 60 UI de heparina/kg de peso (plasma post-heparínico, PPH), recogido en baño de hielo. En caso de conservación de la muestra, se realiza a -70ºC. Junto con LH también se libera la Lipoproteína Lipasa (LPL), siendo necesario el uso de inhibidores y distintos pH para poder medirlas independientemente. El objetivo de nuestro trabajo fue fijar las condiciones óptimas para medir la actividad de LH adaptando el método de Nilsson-Ehle. Se usó un sustrato constituído por [3H] trioleína, albúmina, lisolecitina como emulgente en Buffer Tris-ClH pH=9. Los ácidos grasos liberados se midieron por centelleo líquido. Se probaron distintas concentraciones de sustrato, distintos tiempos de incubación y formas de sonicación para obtener la actividad enzimática máxima. La concentración final de los componentes del sustrato fueron: Trioleína 1.3 µmoles/ml, lisolecitina 0.055 mg/ml, albúmina 0.2% P/V, buffer Tris-ClH 0.11 M pH=9. La prueba se optimizó por agregado de albúmina antes de la sonicación y esta se realizó en 4 ciclos de 60 seg con intervalos de 45 seg. La reacción fue lineal aún a los 90 minutos, y el tiempo de incubación elegido fue de 30 minutos. Se ensayaron distintas diluciones de PPH. Se estudió el efecto de la heparina y del glicerol agregados in vitro a nuestro sistema, sin observarse modificaciones en la actividad enzimática en ningún caso. Se verificó que la concentración óptima de NaCl para lograr la inhibición completa de la LPL, fue de 1 M lo cual aumenta la especificidad del sistema para medida de LH. Con el uso de anticuerpos monoespecíficos anti LH, se comprobó la ausencia de toda otra actividad lipolítica en este sistema. El coeficiente de variación intraensayo fue de 7% y el interensayo de 13%. Este método permite la determinación de la actividad de LH, en forma directa, específica y sensible.