PRIMERA DETECCION DE LA VARIANTE ?2C? DE PARVOVIRUS CANINO EN ARGENTINA

GALLO CALDERÓN, MARINA; BUCAFUSCO, DANILO; KELLER, L; FOGEL, FERNANDO; PERIOLO, OSVALDO; MARCELA IGLESIAS; MATTION, NORA; LA TORRE, JOSÉ

Mar del Plata

Jornada; 6tas. JORNADAS INTERNACIONALES DE VETERINARIA PRÁCTICA; 2009

Colegio de Veterinarios de la Provincia de Buenos Aires

INTRODUCCION: el Parvovirus Canino (PVC) es un virus altamente contagioso, que provoca miocarditis y gastroenteritis hemorrágicas severas en cachorros, mostrando altas tasas de morbilidad y mortalidad. Sumado a que el PVC se libera en cantidades (109 partículas virales por gramo de materia fecal), éste es sumamente resistente a los cambios bruscos de temperatura y pH, al éter, al cloroformo y a la acción de los desinfectantes comunes, por lo que las infecciones se diseminan con facilidad, persistiendo por tiempo prolongado en áreas contaminadas. Se ha demostrado que el PVC mantuvo su capacidad infectante después de haber permanecido en muestras de materia fecal durante 6 meses a temperatura ambiente.El PVC es linfocitotrópico, de manera que al entrar al organismo tiende a invadir tejidolinfoide de la región bucofaríngea y los ganglios linfáticos mesentéricos provocando inmunospresión e infecciones secundarias.Desde su aislamiento en 1978, el PVC ha sufrido cambios antigénicos. Las variantes antigénicas, PVC2a y PVC2b, reemplazaron secuencialmente a la cepa original PVC2 y se encuentran en distintas proporciones en las poblaciones caninas de todo el mundo.Recientemente, se ha descrito por primera vez en Italia en el año 2000 y luego en Vietnam, España y EEUU la aparición de una nueva cepa denominada PVC2c. Esta variante, tiene una sustitución aminoacídica de un ácido Aspártico (Asp) por un ácido Glutámico (Glu) en la posición 426 de la proteína viral VP2. El aminoácido 426, está localizado en el sitio antigénico más importante de PVC. La mutación de Asn-426-Asp permite diferenciar a la cepa PVC-2b de los tipos PVC-2 y PVC-2a. Si bien la vacunación es la manera más práctica, efectiva y económica de prevenir la enfermedad, se han reportado muchos casos de animales que aun estando vacunados, se enferman.Una de las infecciones virales que más se asemeja a la enteritis por PVC, es la enteritis causada por Coronavirus; sin embargo, se considera en términos generales que esta última sigue un curso menos severo que la infección por PVC, siendo menores los porcentajes de mortalidad.La infección de cachorros con el VMC (Virus Moquillo Canino) frecuentemente se asocia a un cuadro entérico, que se manifiesta con diarreas, sin embargo, suele incluir además, problemas respiratorios y/ó, nerviosos que permiten la diferenciación de otras formas de enteritis viral. Las enteritis de origen parasitario deben considerarse en el diagnóstico diferencial, especialmente en cachorros jóvenes; la coccidiosis y la presencia de Ancylostoma spp.suelen producir enteritis severas.El objetivo del presente trabajo, fue por un lado, desarrollar y aplicar un método de diagnóstico molecular específico para PVC y por otro lado, caracterizar mediante técnicas de biología molecular y secuenciación, el PVC proveniente de muestras clínicas de animales con sintomatología compatible con PVC y diferenciarlo de la cepa vacunal.MATERIALES Y MÉTODOS: entre los años 2002 y 2008, se recibieron en el laboratorio, 38 muestras tomadas de animales con sintomatología compatible con PVC. Las mismas provinieron de la Ciudad de Buenos Aires, Tandil, Río Negro, Bahía Blanca y Mar del Plata. En todos los casos, las muestras fueron hisopados rectales. Cada muestra fue acompañada de un formulario con información referida al animal tal como: sintomatología, historial de vacunaciones, sexo, edad, etc. Con los datos obtenidos, se creó una base de datos. Luego del tratamiento de los hisopados rectales con proteinasa K en un buffer de lisis, se extrajo el ADN con fenol-cloroformo ó con un sistema de adsorción de ácidos nucleicos a las partículas de sílica en presencia de altas concentraciones de sal (QiaexII, Qiagen®).Para cada muestra analizada, la tipificación se realizó con 3 reacciones de PCR conteniendo 3 sets de primers diferentes: un set que reconoce a la cepa PVC2 (P2, cuyo producto de amplificación es de 681 pares de bases (pb), otro set que reconoce a las variantes PVC2a y PVC2b (Pab, cuyo producto de amplificación es de 681 pb) y otro set que reconoce a la cepa PVC2b (Pb, cuyo producto de amplificación es de 427 pb). En todos los casos, los primers utilizados, reconocen específicamente fragmentos del gen de la proteína viral 2 (VP2) del genoma de PVC. Los fragmentos de ADN obtenidos fueron secuenciados por Macrogen Inc (Corea). Las secuencias obtenidas, se analizaron y alinearon utilizando el programa Clustal W.RESULTADOS: el ADN de PVC se detectó en 27 de los 38 hisopados rectales analizados. Veintidós de las 27 muestras PVC positivas (81.5%) se obtuvieron de perros que habían sido vacunados contra PVC al menos una vez, con diferentes vacunas comerciales. Tres muestras, se obtuvieron de perros sin vacunar, y el estado de vacunación de los 2 animales restantes es desconocido. Diecinueve de los 22 animales vacunados, habían completado el esquema de vacunación. Se encontraron casos de animales enfermos, vacunados con diferentes marcas de vacunas.La cepa clásica ancestral PVC2 (presente en las vacunas comerciales), no se detectó en ninguna de las muestras clínicas.Nueve muestras fueron identificadas por PCR como PVC2a, y 18 como PVC 2b. Análisis adicionales de secuenciamiento, revelaron la presencia a de la mutación Asp426Glu en la posición 426 de la VP2, característica de la variante PVC2c, en 14 de las 18 muestras inicialmente identificadas como PVC2b.DISCUSION: el análisis molecular de las cepas de PVC, revelo la presencia de la nueva cepa PVC2c en hisopados rectales de perros de la Republica Argentina. La aparición de la variante PVC2c en la Argentina, data del año 2003.La metodología utilizada, permitió además diferenciar claramente, las cepas presentes en las vacunas comerciales, respecto de las cepas de campo.CONCLUSIONES: se detectó y caracterizó por primera vez en Argentina, una variante antigénica importante de PVC que provoca diarreas atípicas severas incluso en cachorros con esquema de vacunación completo.