Caracterización parcial de proteínas sensibles a la fodforilación en tirosina detectadas por incubación de HUVEC con plasmas de embarazadas

POWAZNIAK Y; SANCHEZ-LUCEROS A; FARIAS CE; GROSSO S; DOMINGUEZ MARIA PAZ; KELLER L; KEMPFER A C; LAZZARI MA

Mar del Plata

Congreso; SAIC; 2005

ADAMTS13 y factor von Willebrand (VWF) sufren variaciones máximas en el tercer trimestre del embarazo. El VWF ha sido usado como marcador de daño endotelial. Su relación con apoptosis y angiogénesis en el embarazo normal no ha sido explorada. En la placenta la apoptosis aumenta progresivamente en el embarazo. El aumento de VWF y/o disminución de ADAMTS13 podrían actuar como factores proapoptóticos responsables del incremento del índice apoptótico endotelial en el embarazo normal. La familia de las MAPkinasas (MAPk) participa en señales de sobrevida o muerte celular y muchas de ellas se activan a partir de la fosforilación en tirosina. En este trabajo evaluamos la cinética de activación de las fosfatasas y los perfiles de fosforilación en tirosina de HUVEC incubadas con plasma (P) de embarazadas de tercer trimestre (PE). Los cultivos de HUVEC fueron incubados 5, 15, 30 y 60 minutos con PE y P normales (PN). Los estudios de caracterización se llevaron a cabo mediante electroforesis en 6, 10 y 15% SDS-PAGE, transferencia a nitrocelulosa y detección inmunoenzimática utilizando como primer anticuerpo antifosfotirosina. Con el agregado de P se observa la aparición de una banda de 49 ± 3 kDa (n=3) ausente en las células sin tratamiento. A los 30 y 60 min de tratamiento aparece una banda de 43 ± 3 kDa en la incubación con PE (ausente con PN) y una de 53 ± 1 kDa en la incubación con PN (ausente con PE), n=3. La cantidad de fosfotirosina en los perfiles varía desde tiempo 0 hasta los 60 min. La incubación con PE indujo la aparición de una banda a los 30 y 60 min, que podría corresponder a la activación de MAPK, que no fue observada con la incubación con PN. La identificación de las bandas requerirá el uso de anticuerpos específicos para las proteínas de la familia de las MPAK y una vez identificadas se evaluará su rol en la fisiología placentaria.