Identificación de Marcadores Moleculares en el Genoma de la Vicuña mediante análisis de clones de una genoteca parcial de ADN

CORIA, MS; RIVERO, MB; LONGO, AE; MICELI, DC; VALDECANTOS, PA

Tafí del Valle Tucumán

Jornada; XXVIII Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2011

Asociación de Biología de Tucumán

IDENTIFICACIÓN DE MARCADORES MOLECULARES EN EL GENOMA DE VICUÑA MEDIANTE ANÁLISIS DE CLONES DE UNA GENOTECA PARCIAL DE ADN Coria, MS1; Rivero, MB1; Longo, AE1; Miceli, DC1,2; Valdecantos, PA1. 1Instituto de Biología Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia ? UNT. 2INSIBIO (CONICET-UNT). Chacabuco 461. (4000) Tucumán. Argentina. pvaldecantos@fbqf.unt.edu.ar La supervivencia de las vicuñas (Vicugna vicugna) estuvo amenazada. El programa de conservación implementado a partir de la década del 70, logró rescatar a esta especie silvestre con éxito del peligro de extinción. Debido a que podrían haber experimentado una disminución en su diversidad genética, se ha estudiado la diversidad y estructura genética de poblaciones de vicuñas con los clásicos marcadores moleculares microsatélites (ADN nuclear) y mitocondriales (citocromo b y región control). En este trabajo, mediante la construcción de una pequeña genoteca (minibiblioteca de ADN genómico), nos proponemos identificar otros marcadores que podrían ser útiles en el estudio de la diversidad genética de poblaciones de vicuñas y el análisis genotípico y taxonómico de los Camélidos Sudamericanos. Para llevar a cabo este objetivo, se extrajo ADN genómico de muestras de sangre de vicuñas y se digirió parcialmente con la endonucleasa de restricción Hind III; los fragmentos obtenidos se separaron mediante electroforesis en geles de agarosa teñidos con gelGreen (Biotium) y aquellos con tamaños comprendidos entre 2.000 a 5.000 pares de bases (pb) se clonaron en el vector pJET1.2 en la cepa Top10 de E. coli. Actualmente se cuenta con 10 clones que contienen fragmentos de ADN genómico de vicuña del tamaño esperado. Se secuenciaron los extremos de 2 clones. Las secuencias nucleotídicas de ambos extremos del clon 1 fueron comparadas con las de las bases de datos del NCBI mediante el programa BLAST (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi); ambas presentan una identidad del 72% con sendas secuencias del cromosoma 8 humano (Código de acceso AC104940), siendo similares a secuencias de retrotransposones de la familia L1, dispersa en el genoma de mamíferos. La secuencia de nucleótidos de un extremo del clon 2, de 720 pb, presenta una similitud del 69% con un intrón del gen TRAPPC9 que codifica a la proteína reguladora de la actividad del factor de transcripción NF-kappa-B. El diseño de cebadores específicos para amplificar estas secuencias en distintos individuos y la secuenciación de los mismos permitirá identificar alelos de estos clones.