Pequeñas perturbaciones estructurales de las variantes N-terminal de Apolipoproteína A-I humana implicadas en el plegamiento anómalo

GADDI, GM; FINARELLI; GS; CURTO, ML; GISONNO, R; ROSU; SA; CORTEZ, MF; RODRIGUEZ, AL; RAMELLA; NA; TRICERRI, MA

la plata

Jornada; JORNADAS DE INVESTIGACIÓN Y EDUCACIÓN DE LA FACULTAD CS MÉDICAS 2018; 2018

facultad de ciencias medicas

ntroducción: Amiloidosis es una enfermedad que se caracteriza por el plegamiento anómalo de un grupo diverso de proteínas que lleva a la formación de depósitos amiloides, como por ejemplo, las variantes naturales de Apolipoproteína A-I humana: Trp 50 Arg (W50R) y Leu 60 Arg (L60R); ambas localizadas en el N-terminal y causantes de amiloidosis renal con localización preferentemente glomerular y túbulo intersticial respectivamente. Objetivos: analizar las características estructurales de la secuencia nativa (Wt) y las dos variantes, determinar la tendencia a la agregación frente a ligandos celulares: Glucosaminoglucanos (heparina) y lípidos negativos (SDS); estudiar la liberación de citoquinas pro inflamatorias en un modelo de células humanas. Materiales y métodos: la desnaturalización química fue seguida por medición de fluorescencia intrínseca de trp en función de la concentración de guanidina clorhídrica a pH 7,4 y 5,0; dicroísmo circular a pH 7,4: en el lejano para la determinación de la estructura secundaria de Wt y sus variantes, en el cercano para observar cambios en la estructura terciaria de las proteínas; unión a sonda Bis ANS para determinar la exposición de bolsillos hidrofóbicos; la tendencia de agregación se analizó a p H 7,4 y p H 5,0 en presencia y ausencia de heparina y solo a pH fisiológico para SDS durante 48 horas a 37 ° C y agitación constante; por último se incubaron 1ug/ml de las tres proteínas frente a una línea celular llamada THP-1 durante 3 horas y posteriormente se midió la citoquina TNF empleando un Kit de ELISA. Resultados: L60R es más inestable frente a Wt y W50R a ambos pHs, además presenta una pérdida de bolsillos hidrofóbicos y menor contenido de estructura alfa respecto a la secuencia nativa. En cuanto al análisis de la estructura terciaria en el rango 250-280 se puede apreciar pequeñas diferencias estructurales respecto a Wt. Esta variante exhibe un incremento en el rendimiento cuantico de la sonda Tioflavina T en presencia de SDS, lo que es indicativo de un aumento en la tendencia de la agregación. En cuanto a la producción de la repuesta inflamatoria se podría deducir que la variante L60R induce una mayor liberación de TNF respecto a Wt y W50R. W50R a p H 5,0 en presencia de heparina, como modelo de GAG, induce un aumento en la tendencia a la agregación respecto a las otras dos proteínas analizadas y no induce respuesta inflamatoria significativa en las condiciones analizadas.