Respuesta inmune inducida en ratones por una estrategia de vacunación "prime-boost" heterólogo contra paratuberculosis

COLOMBATTI OLIVIERI, MA; CUERDA, MX; DEL MEDICO ZAJAC, MP; CALAMANTE, G; MOYANO, RD; GRAVISACO, MJ; SANTANGELO, MP; ROMANO

Salta

Congreso; XI Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2018

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) es el agente causal de la paratuberculosis bovina. Los ratones BALB/c son el modelo experimental de elección para un análisis preliminar de candidatos a vacunas. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la respuesta inmune inducida por la estrategia de vacunación "prime-boost" heterólogo utilizando una cepa local de Map inactivada (prime) y como refuerzo al virus Modified Vaccinia Ankara que expresa el antígeno 85A (MVA85A) de Mycobacterium bovis (boost). Se utilizaron 5 grupos de 5 ratones hembras BALB/c de 6-7 semanas de edad: A) control no vacunado (solo adyuvante), B) control adyuvante + refuerzo de MVA85A C) 2 dosis de vacuna comercial Silirum®, D) 2 dosis de cepa local 6611 inactivada, y E) 2 dosis de cepa local 6611 inactivada con un refuerzo de MVA85A. Se preparó el inóculo de la cepa local 6611 (virulenta para ratones) mediante la eliminación de aglomerados bacterianos con pasajes de aguja 25G, se inactivó por calor y se llevó a una concentración de 2,5 mg de pellet seco/ml con adyuvante Montanide ISA 206 (Seppic). El MVA85A fue amplificado en fibroblastos de embrión de pollo (FEP) de 11 días de edad. Se administraron subcutáneamente 0,2 ml de la vacuna Silirum® o de la cepa local 6611 inactivada y se administró el refuerzo de MVA85A intraperitonealmente (IP) a una concentración de 1,2 x 106 UFP/ml. Los animales que no recibieron el MVA, fueron inoculados IP con el sobrenadante de FEP sin infectar. Las dosis se administraron con una diferencia de 17 días. Se realizó extracción de sangre a las 4 semanas post-ultima dosis de vacunación (spv) para medición de IgG por ELISA frente a los antígenos PPA-3, lisado de Map y Ag85A. A ese tiempo se sacrificaron los animales y se procedió a la extracción de los esplenocitos del bazo. Se estimularon 5x105 células/well, con PPD aviar, lisado de Map o Ag85A y se tomó el sobrenadante de cultivo a las 16 y 72hs para la cuantificación de citoquinas por citometría de flujo (IL-2, IL-4, IL-6, IFNg, TNF, IL-17 e IL-10) con el kit comercial BDTM CBA Mouse Th1/Th2/Th17. Se observó producción significativa de IgG en los ratones vacunados con 6611 inactivada con o sin refuerzo de MVA85A para todos los diferentes antígenos utilizados (PPA-3, lisado de Map, Ag85A), siendo más significativo en el grupo con MVA85A. El grupo vacunado con Silirum tuvo producción de IgG pero la misma no fue significativa con respecto a los grupos controles. Con respecto a la producción de citoquinas se detectó producción significativa de citoquinas con respecto al grupo control en las citoquinas que se indican entre paréntesis: en el grupo vacunado con Silirum (IL-10, IL-17A, IL-6 y TNF), 6611 (IFNg, IL-2, IL-4, IL-10, IL-17A, TNF e IL-6) y 6611+MVA85A (IFNg, IL-2, IL-4, IL-10, IL-17A, TNF e IL-6). No se detectó producción significativa en el grupo control que recibió el MVA85A. El estímulo con el lisado de Map fue el que indujo una mayor producción de citoquinas. El grupo que recibió el esquema prime-boost heterólogo fue el que tuvo una mayor producción de citoquinas frente al estímulo con todos los antígenos utilizados (PPA-3, lisados de Map, Ag85A) y en ambos tiempos post-estimulo (16 y 72hs). La estrategia prime-boost heterólogo logró inducir una mayor respuesta inmunológica (Th1/Th2/Th17) con respecto al uso de la vacuna inactivada sola. A su vez la vacuna con la cepa local 6611 estimula una mayor respuesta inmune que la vacuna comercial Silirum.