MVA recombinantes que expresan la glicoproteína del virus rábico inducen una respuesta inmune humoral específica y duradera en ratones

GARANZINI D P, DEL MÉDICO ZAJAC M P, CALAMANTE G; PEREZ, O

CABA

Simposio; I SIMPOSIO INTERNACIONAL X JORNADAS Y REUNIÓN ANUAL DE LA ASOCIACIÓN ARGENTINA DE INMUNOLOGÍA VETERINARIA; 2017

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

La estrategia de control de la rabia en nuestro país se realiza con vacunas basadas en virus rábico inactivado (producidas por amplificación viral en sustratos celulares), que si bien son efectivas, presentan ciertas desventajas por la composición indefinida del antígeno, manipulación de grandes cantidades del patógeno en las plantas de producción, necesidad de estricta cadena de frío y la dificultad para diferenciar animales infectados de vacunados. Existen numerosos ejemplos de desarrollos biotecnológicos que demuestran que es posible articular la inversión estatal con la industrial para generar servicios y productos biotecnológicos de impacto productivo y/o social. De esta forma se podrían superar los inconvenientes de las vacunas tradicionales mencionados desarrollando vacunas basadas en microorganismos vivos no replicativos, diseñadas racionalmente para que, induciendo diferentes ramas del sistema inmune, sean seguras y efectivas para la prevención de enfermedades infecciosas. En particular, el virus vaccinia Ankara modificado (MVA) ofrece numerosas ventajas para el desarrollo de vacunas: estabilidad (física y genética), administración por diferentes vías, inducción de respuestas inmunes humorales y celulares protectoras e inmunidad duradera, ausencia de replicación en la mayoría de las células de mamíferos. El antígeno de interés para el desarrollo de vacunas antirrábicas biotecnológicas (vectorizadas por virus o a subunidades proteicas) es la glicoproteína del virus rábico (RG). Esta proteína es la única expuesta en la superficie del virión y es capaz de inducir respuesta inmune humoral (posee un gran número de sitios antigénicos blanco de anticuerpos neutralizantes)Los objetivos de este trabajo son la obtención de MVA recombinantes que expresen la proteína RG y la evaluación de la respuesta inmune humoral inducida en ratones. Los MVA recombinantes se obtienen por recombinación homóloga entre el genoma del virus y un vector de transferencia que porta el gen de interés flanqueado por regiones genómicas que serán el blanco de inserción. Para obtener el virus MVA-RG la secuencia codificante de la proteína RG se clonó en el vector de transferencia VT-Mtk-GUS (obtenido previamente en nuestro laboratorio) y se transfectaron fibroblastos de embrión de pollo previamente infectados con MVA. Los virus recombinantes se aislaron por su capacidad de formar placas de lisis azules en presencia del sustrato de la enzima GUS. La presencia y expresión del gen de interés se confirmó mediante PCR y Western blot, respectivamente. Posteriormente, ratones Balb/C se inmunizaron intraperitonealmente con dos dosis de 10E+06 unidades formadoras de placas de MVA (recombinante o no recombinante) a los días 0 y 21. A distintos tiempos post inmunización se realizaron sangrías exploratorias y se evaluó la presencia de anticuerpos específicos anti virus rábico mediante ELISA.Se obtuvieron los virus MVA-RG y se confirmó la expresión del antígeno de interés mediante la técnica de Western blot. La presencia del gen de interés y la pureza del stock viral recombinante se confirmaron por amplificación por PCR.En las muestras de suero provenientes de los ratones inmunizados con MVA no recombinante no se detectaron anticuerpos anti virus rábico. En cambio, la inmunización de ratones con MVA-RG indujo una respuesta inmune específica que fue potenciada por la aplicación de la dosis de refuerzo (diferencias significativas p