Deleción de genes inmunomoduladores del genoma de MVA: efecto sobre su inmunogenicidad.

HOLGADO, M.P.; MAETO, C.A.; FALIVENE, J.;; DEL MÉDICO ZAJAC, M.P.; CALAMANTE, G. ; GHERARDI, MM

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología. II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología

El virus Vaccinia Ankara Modificado (MVA) aún conserva genes relacionados con la evasión de la respuesta inmune del huésped. Previamente, nuestro grupo reportó la optimización del potencial vacunal de este vector al cual se le había delecionado el gen C12L, que codifica para una proteína de unión a IL-18. En este trabajo analizamos la inmunogenicidad del vector MVA luego de la deleción dos genes virales: el A44L, implicado en la síntesis de hormonas esteroideas, y el A46R, que inhibe la señalización de receptores Toll (MVAΔA44L-A46R: MVAd). Como así también el análisis de las tres deleciones en simultáneo (MVAΔC12L/ΔA44L-A46R: MVAt).Para ello, ratones C57BL/6 fueron inmunizadas por vía intramuscular con el virus salvaje (MVAwt) o los virus delecionados (ΔMVAs). Evaluamos la respuesta celular T frente a epitopes del virus Vaccinia a los 7 y 45 dias post-inmunización (dpi), correspondientes a las etapas de respuesta aguda y de memoria, respectivamente, en bazo y ganglios ilíacos. La proporción de células productoras de IFN e IL-2 se evaluó mediante ELISPOT y la producción de citoquinas a través de ELISA. Asimismo, analizamos el porcentaje de T-CD8 citotóxicas por citometría de flujo, mediante la expresión de CD107, como también la proliferación de las distintas subpoblaciones de memoria valiéndonos de la sonda CFSE y la expresión de CD44 y CD62L. Para estudiar la respuesta innata inducida por el virus, se inmunizaron ratones con el MVAwt y el MVAt, y se evaluó por ELISA el patrón de citoquinas producido entre las 0 y 30 horas post-inoculación (hpi).A los 7 dpi, los ΔMVAs indujeron un aumento significativo en el número de T-CD8 y CD4 productoras de IFN específicas contra Vaccinia en comparación al MVAwt, como así también en el número de T-CD8 productoras de IL-2. Este incremento, también se observó a los 45 dpi. El porcentaje de T-CD8 de memoria que proliferó luego de la estimulación fue mayor en el grupo inmunizado con MVAt (6%) que en el MVAwt (3%), obteniéndose resultados similares en la población T-CD4 (7% vs 1% respectivamente). Dentro de las células que proliferaron, el MVAt indujo una mayor proporción de células de memoria central (TMC:37%) y de memoria efectora (TME:25%) versus el MVAwt (TMC:20%,TME:11%). Resultados similares se obtuvieron para la población T-CD4 (TMC:37%,TME:16% y TMC:8%,TME:2% respectivamente). Sumado a esto, los ∆MVAs indujeron mayor porcentaje de T-CD8 específicas productoras de IFN y con capacidad citotóxica. Finalmente observamos que el MVAt produjo mayores niveles de IFN e IL-12 a las 20 y 30 hpi en comparación al MVAwt.La deleción simultánea de genes específicos del genoma de MVA, cuyas funciones se encuentran inter-relacionadas, compone una estrategia apropiada para aumentar el potencial vacunal de este vector, creando una herramienta útil y versátil, para ser utilizada en el desarrollo de vacunas frente a infecciones tales como HIV, Malaria y Tuberculosis.