Obtención de vectores no replicativos para la expresión in vivo de la glicoporteína del virus rábico.

GARANZINI, D; DEL MÉDICO ZAJAC, M.P.; CALAMANTE, G. ; PEREZ, O

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología. II Congreso Latinoamericano de Virología.; 2015

Sociedad Argentina de Virología

La rabia es una enfermedad zoonótica de evolución aguda, habitualmente mortal. Es causada por el virus de la rabia (RV) el cual se transmite entre algunas especies de sangre caliente y el hombre. La vacunación periódica y masiva es la forma de prevención más eficaz. Las vacunas que se utilizan en nuestro país están basadas en virus rábico inactivado (producidas por amplificación viral en sustratos celulares), que si bien son efectivas, presentan ciertas desventajas por la composición indefinida del antígeno, manipulación de grandes cantidades del patógeno en las plantas de producción, necesidad de estricta cadena de frío y la dificultad para diferenciar animales infectados de vacunados. Estos inconvenientes se pueden superar desarrollando vacunas biotecnológicas basadas en microorganismos vivos o vacunas génicas, diseñadas racionalmente para que sean seguras y efectivas para la prevención de enfermedades infecciosas. Se ha reportado la utilización de vectores virales (replicativos o no) para la expresión de la glicoproteína (RG) del virus rábico, principal antígeno responsable de inducir inmunidad protectora en el hospedador. En particular, los vectores basados en poxvirus y adenovirus ofrecen numerosas ventajas para el desarrollo de vacunas: estabilidad (física y genética), administración por diferentes vías, inducción de respuestas inmunes humorales y celulares protectoras e inmunidad duradera. Además, se utilizan combinados en esquemas de inmunización heterólogos.El objetivo de este trabajo es obtener y caracterizar molecularmente vectores que porten y expresen la secuencia codificante de la glicoproteína de RV basados en virus vaccinia Ankara modificado (MVA), adenovirus (AdHu5) y vacuna génica (plásmido pCI-Neo). Para obtener el adenovirus que exprese la glicoproteína de RV se utilizó la tecnología de clonado Gateway® (Life-Technologies). Se amplificó por PCR el gen RG, se clonó en el vector pCR?8/GW/TOPO® (vector de entrada) y se introdujo en el vector de destino (pAd/CMV/V5 DEST?) por recombinación sitio específica. El vector pAd-RG se transfectó en células 293A y se identificó el virus recombinante por la presencia de efecto citopático. Para obtener el virus MVA-RG se clonó el gen RG en el vector de transferencia (VT) VT-Mtk-GUS (obtenido previamente en nuestro laboratorio) y se transfectaron fibroblastos de embrión de pollo previamente infectados con MVA. Los virus recombinantes se aislaron por su capacidad de formar placas de lisis azules en presencia del sustrato de la enzima GUS (X-Gluc). Además, el gen RG se clonó direccionalmente en el vector pCI-Neo río abajo del promotor de CMV. La presencia y expresión del gen de interés se confirmó en células infectadas o transfectadas con cada uno de los vectores mediante PCR y Western blot, respectivamente En este trabajo se obtuvieron los vectores recombinantes MVA-RG, Ad-RG y pCI-RG. La inmunogenicidad y eficacia de estos vectores se evaluará solos o combinados en el modelo murino.