Obtención y caracterización molecular de virus vaccinia ankara modificado que expresan la proteína f del virus respiratorio sincicial bovino

FERELLA, A.; DUS SANTOS, M.J.; MOZGOVOJ, M.; .; CALAMANTE, G. Y DEL MÉDICO ZAJAC, M.P

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología. II Congreso Latinoamericano de Virología.; 2015

Sociedad Argentina de Virología

El virus respiratorio sincicial bovino (bRSV) es una de las principales causas de neumonías en terneros de temprana edad a nivel mundial. Si bien hay disponibles en el mercado numerosas vacunas convencionales, existe una demanda creciente en cuanto al desarrollo de vacunas de nueva generación, más eficientes, capaces de inducir una respuesta inmune duradera en el tiempo. Una estrategia novedosa en el desarrollo de vacunas que permiten mejorar la inmunidad es el empleo de vectores virales que expresen proteínas inmunorelevantes, como el virus vaccinia ankara Modificado (MVA), ampliamente utilizado para el desarrollo de vacunas seguras y efectivas para humanos y en medicina veterinaria. Además, con el propósito de obtener vectores optimizados basados en MVA recientemente hemos obtenido y caracterizado un vector que carece del gen codificante de la proteína de unión a IL-18 (MVAd008) y observamos un aumento en la respuesta celular T CD4+ y CD8+ respecto del vector viral convencional en ratones. Estos resultados sugieren que el vector optimizado MVAd008 constituye una interesante herramienta a utilizar al momento de diseñar vacunas de nueva generación. El objetivo de nuestro trabajo consistió en la obtención de un MVAd008 recombinante que exprese la proteína F de bRSV. Se seleccionó la proteína F de bRSV como antígeno de interés por ser la principal inductora de inmunidad protectora. Por otra parte, dado el gran tamaño del genoma de los poxvirus se descarta la manipulación directa del ADN y los virus recombinantes se obtienen por recombinación homóloga entre el genoma del virus y un vector de transferencia (VT) que porta el gen de interés flanqueado por regiones genómicas que serán el blanco de inserción. Para la obtención del MVA recombinante se subclonó direccionalmente la secuencia codificante de la proteína F en el VT-Mtk-GUS río abajo del promotor poxviral. Este vector contiene además un cassette para la expresión de la enzima beta-glucuronidasa (GUS) y secuencias flanqueantes correspondientes al gen MVA086R (sitio blanco de recombinación). La identidad del gen de interés se confirmó por secuenciación. El VT-Mtk-F se transfectó en cultivos de fibroblastos de embrión de pollo infectados con MVAd008 y los virus recombinantes se aislaron por su capacidad de formar placas de lisis azules en presencia del sustrato de la enzima GUS (X-Gluc). La presencia y expresión de la secuencia codificante de la proteína F se confirmó mediante amplificación por PCR y RT-PCR, respectivamente.En este trabajo se obtuvieron virus MVA recombinantes que expresan la proteína F del virus respiratorio sincicial bovino. Su capacidad inmunogénica y protectora se evaluará en el modelo murino.