Obtención y caracterización de un virus vaccinia Ankara modificado (MVA) recombinante que expresa un multiantíeno de Babesia bovis.

JARAMILLO ORTIZ, J.; DEL MÉDICO ZAJAC, M.P.; ZANETTI, F.A.; WILKOWSKY, S.; CALAMANTE, G.

Vaquerias, Cordoba

Congreso; XXXII Reunión Científica Anual de la SAV; 2012

Durante los últimos 15 años los vectores virales no replicativos basados en poxvirus han sido evaluados exitosamente como candidatos a vacunas para la prevención de enfermedades de interés en salud humana, inmunoterapia para cáncer y sanidad animal. En particular, el virus vaccinia Ankara modificado (MVA), que no replica en la mayoría de las células de mamíferos, constituye uno de los candidatos de elección por su seguridad y versatilidad para la expresión de proteínas heterólogas. La babesiosis bovina es una infección parasitaria transmitida por garrapatas que causa significativa morbilidad y mortalidad en el ganado bovino, especialmente en el norte de nuestro país. Los agentes etiológicos son los protozoarios intraeritrocíticos Babesia bovis y Babesia bigemina. La enfermedad se controla mediante el uso de acaricidas, antiparasitarios y la vacunación con cepas vivas atenuadas. Estas vacunas, efectivas en una dosis, presentan desventajas desde el punto de vista de la bioseguridad. En el caso de la babesiosis, la protección no es inducida por la respuesta inmune generada contra un único antígeno. En el área del desarrollo de vacunas no convencionales se identificaron algunas proteínas del patógeno altamente inmunogénicas como por ejemplo Msa-2c, Rap1 y Hsp20. El objetivo de este trabajo fue la construcción de virus MVA recombinante capaz de expresar in vivo el multiantígeno de B. bovis (MAB) que expresa en un único marco de lectura las secuencias codificantes de tres proteínas inmunogénicas de este patógeno. La secuencia codificante del multiantígeno que comprende a las proteínas Msa-2C, Rap1 y Hsp20 fue subclonado de manera direccional en el VT-Mtk-GUS, río abajo del promotor temprano sintético pE/L de poxvirus. Este VT contiene además un cassette para la expresión de la proteína marcadora beta-glucuronidasa (GUS) y secuencias flanqueantes correspondientes al gen MVA086R, que permitirá la recombinación homóloga in vivo con el genoma viral. El VT obtenido se transfectó en cultivos de fibroblastos de embrión de pollo infectados con MVA y los poxvirus recombinantes se aislaron por su capacidad de formar placas de lisis azules en presencia de X-Gluc, sustrato de la enzima GUS. Mediante la técnica de WB se confirmó la presencia de una banda reactiva del tamaño esperado para el MAB, que fue reconocido por antisueros específicos contra las proteínas Msa-2C, Rap1 o Hsp20. Posteriormente, los virus MVA-MAB se inocularon en ratones Balb/C y se observó la inducción de anticuerpos contra la proteína heteróloga. En este trabajo se obtuvo un vector viral que expresa un multiantígeno de B. bovis capaz de inducir una respuesta inmune específica al ser inoculado en ratones. En el futuro, la respuesta inmune (humoral y celular) inducida por MVA-MAB será evaluada en bovinos.