Detección molecular del gen lnu(B) en cepas de Streptococcus agalactiae en la provincia de Misiones

SOTO, PAULA A.; BOBADILLA FJ; NOVOSAK MG; FONSECA MI; PEGELS MI; OVIEDO PM; QUIROGA MI; LACZESKI ME; VERGARA MI

Santa Fe

Congreso; III Congreso Bioquímico del litoral y XVI Jornadas Argentinas de Microbiología; 2015

Sociedad Argentina de Bioquímica

Streptococcus agalactiae (SGB) es la principal causa de infecciones neonatales, provocando neumonía, sepsis y meningitis. SGB coloniza tracto gastrointestinal y geniturinario humano. El niño adquiere el microorganismo de la madre colonizada antes o durante el parto. El Centro para Control y Prevención de Enfermedades (CDC), propone dos estrategias para prevenir la morbilidad y mortalidad infantil: identificar los factores de riesgo (nacimiento previo con enfermedad invasiva por SGB, bacteriuria por SGB durante el embarazo, parto prematuro, temperatura intraparto igual o mayor de 38ºC, rotura prematura de membrana igual o mayor de 18 h) y detección de la portación de SGB en el tracto genito anal de la embarazada entre las 35 ? 37 semanas de gestación. Detectada la colonización, la profilaxis intraparto (PIP) con penicilina ha redundado en el descenso de la enfermedad neonatal invasiva en aquellas regiones que la han adoptado.En pacientes con alergia a beta-lactámicos el uso de macrólidos está recomendado. Debido al aumento de la resistencia a estos antimicrobianos durante la última década, es necesario su monitoreo en SGB.Recientemente se ha descripto un nuevo gen, el lnu(B) involucrado en el desarrollo de resistencia a Lincosamidas que codifica para una enzima lincosamida nucleotidiltransferasa responsable de la inactivación de aquélla por un mecanismo de adenilación. Fenotípicamente esta resistencia se evidencia por resistencia a Clindamicina (CLI) y sensibilidad a Eritromicina (ERI) en las pruebas de sensibilidad por difusión, la que se identifica como fenotipo L.El objetivo de este trabajo fue detectar la portación del gen lnu(B) en cepas de SGB recuperadas del tracto genito-anal de gestantes en el último periodo de gestación. Se estudiaron 150 cepas de SGB en las que previamente se determinaron los fenotipos de resistencia a macrólidos-lincosamidas-estreptograminas B (MLSB) con el ensayo de doble-disco (D-test) en agar Mueller-Hinton (Britania, Argentina) suplementado con sangre ovina al 5% con discos de ERI (15 µg) y CLI (2 µg) (Britania, Argentina) según recomendaciones e interpretación del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Para este estudio las cepas fueron recuperadas de su conservación a -80ºC en leche descremada al 20% en placas de agar sangre ovina al 5% y evaluada su viabilidad y pureza mediante pruebas bioquímicas y serología de grupo. La portación del gen lnu(B) se investigó con técnica de PCR convencional, utilizando cebadores diseñados con el programa Primer3 versión 0.4.0 y la secuencia del gen fue obtenida de GenBank (N° AJ238249). La puesta a punto de la técnica se realizó con una cepa de SGB portadora del gen lnu(B) cedida por la Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud- (ANLIS) ?Dr. Carlos Gregorio Malbrán?. El fenotipo L y la presencia del gen lnu(B) no fueron detectados obteniéndose resultados concordantes por métodos fenotípicos y moleculares. Nuestros resultados concuerdan con otros autores que indican asociación entre detección fenotípica y molecular del mecanismo de resistencia por adenilación de lincosaminas.El monitoreo constante de la sensibilidad a macrólidos y la investigación de nuevos mecanismos de resistencia es necesario para contribuir a la prevención de la severa enfermedad neonatal causada por SGB.