CARACTERIZACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNE HUMORAL CONTRA CUATRO PROTEÍNAS RECOMBINANTES DE NEOSPORA CANINUM FORMULADAS CON LIPOSOMAS Y ODN-CPG EN BOVINOS

NOVOA, MARÍA B.; SARLI, MACARENA; REIDEL, IVANA; SIGNORINI, MARCELO L.; VEAUTE, CAROLINA; ECHAIDE, IGNACIO E.; PRIMO, MARÍA E.

La Plata

Congreso; XII Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2019

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

Neospora caninum es un parásito protozoario intracelularobligado del phyllum Apicomplexa. La neosporosis esuna de las principales causas de aborto en los bovinos.Para controlar la infección y el aborto producido por N.caninum se requiere una respuesta inmune de tipo Th1,con producción de inmunoglobulinas de isotipo IgG2. Losanticuerpos específicos controlan la expansión inicial enla fase de multiplicación rápida, facilitando la lisis de losparásitos extracelulares. Distintas proteínas de N. caninumse probaron como inmunógenos en ratones y en bovinos,logrando una protección parcial. El adyuvante utilizado enla formulación de una vacuna, es un factor clave para dirigirla respuesta inmune hacia el perfil necesario e incrementarsu eficacia. Se evaluó la respuesta inmune humoral (IgGtotal, IgG1 e IgG2) generada por un inmunógeno constituidopor las proteínas recombinantes MIC1, MIC3 (micronemas),SRS2 (superficie de los taquizoitos) y GRA7 (gránulosdensos) de N. caninum, formulado con liposomas catiónicos(Lip) y oligodesoxinucleótidos CpG no metilados (ODNCpG) como adyuvante. Las proteínas recombinantes fueronexpresadas en Escherichia coli con una cola de 6 histidinas,y purificadas en una columna de NTA-Níquel. Los Lip seobtuvieron a partir de dipalmitoilfosfatidilcolina, colesteroly estearilamina (7:2:2 molar) por el método de InyecciónEtanólica. El agregado de ODN-CpG se realizó sobre lasformulaciones pre-armadas previo a las inoculaciones.Se utilizaron 18 novillos de 3 años de edad divididos alazar en 3 grupos (G). Los animales fueron inmunizadospor vía SC con dos dosis (día 0 y 21) de las siguientesformulaciones: GA: Lip+ODN-CpG + 100 µg de cadaproteína recombinante, GB: Lip+ODN-CpG, GC: PBS. Losnovillos fueron desafiados con 1x108 taquizoitos de la cepaNC-1 de N. caninum en el día 56. Se tomaron muestrasde suero semanalmente hasta el día 102. Los nivelesde IgG, IgG1 e IgG2 específicos para cada antígeno seevaluaron mediante ELISAs indirectos (ELISAi) basados encada una de las proteínas recombinantes. Los niveles deanticuerpos inducidos contra las proteínas recombinantesse compararon entre grupos mediante un modelo linealgeneralizado de mediciones repetidas con distribucióngamma, según la distribución de la variable de respuesta.Los animales del GA mostraron un incremento significativoen los niveles de IgG contra las proteínas MIC1, MIC3 ySRS2, 7 días después de la segunda inmunización (p