EVALUACIÓN DE LA CONSERVACIÓN DE PLACAS DE ELISA TAPIZADAS CON LA PROTEÍNA RECOMBINANTE SAG1 PARA DIAGNÓSTICO DE NEOSPOROSIS

NOVOA, MARÍA B.; AGUIRRE, NERINA P.; SARLI, MACARENA; ECHAIDE, IGNACIO E.; SIGNORINI, MARCELO L.; PRIMO, MARÍA E.

La Plata

Congreso; XII Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2019

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

La neosporosis es una enfermedad parasitaria causadapor Neospora caninum, un protozoario intracelular obligado.Provoca abortos en vacas y lesiones neurológicas enterneros. La prueba de referencia para el diagnóstico es lainmunofluorescencia indirecta (IFI). Dado que es una técnicasubjetiva y laboriosa, se desarrollaron enzimoinmunoanálisis(ELISA), objetivos y automatizables, utilizando lisados detaquizoitos. En el Laboratorio de Inmunología y ParasitologíaVeterinaria del INTA Rafaela, se desarrolló un ELISA decompetición (ELISAc) basado en la proteína recombinanteSAG1 y el anticuerpo monoclonal (AcM) P1C2D8F8(ELISAcSAG1t). El objetivo del presente trabajo fue evaluardiferentes tratamientos para la conservación de las placasde ELISA tapizadas con la proteína recombinante SAG1.Se tapizaron 26 placas de ELISA con 1 µg de SAG1 porpocillo, diluido en PBS hasta una concentración de 0,02 µg/μl, y se incubaron a 4ºC durante 16 h. Luego las placas sedividieron en 4 grupos: GA (n= 10) se lavaron 2 veces conPBS; GB (n= 10) se bloquearon con PBS con 10% de lechedescremada (PBS-L) y se lavaron con PBS con 0,05% detween 20 (PBS-T); GC (n= 4) se bloquearon con PBS-L, selavaron con PBS-T y se incubaron con 100 µl de un líquidosellador de placas de ELISA (Candor, Alemania); y GD (n=2) o grupo control fueron utilizadas en el día. Todas lasincubaciones se realizaron a 25ºC durante 40 min. Luego,las placas de los GA, GB y GC se envasaron al vacío yse almacenaron a 4ºC durante un año. Cumplido el tiempode almacenamiento, las placas del GA se bloquearon conPBS-L, se lavaron PBS-T y luego se procesaron en paralelocon las placas de los GB y GC. Los sueros y controles seanalizaron por duplicado diluidos 1:2 en PBS-L-T. En cadaplaca se utilizaron 4 controles: i) suero positivo fuerte, ii)suero positivo débil, iii) suero negativo y iv) sin suero (controlde conjugado, Cc); y se analizaron 44 sueros de bovinospreviamente clasificados por IFI (22 sueros negativos y 22positivos). Los resultados se expresaron en porcentaje deinhibición (%I) según la fórmula: %I =100- [(DOmuestra/DOCc) x 100]. El punto de corte del ELISAcSAG1t, establecidopreviamente, fue ≥29 %I. Se compararon los %I de lasmuestras analizadas en las placas de los grupos GA, GBy GC con los del GD utilizando el test de Wilcoxon paradatos pareados. Los resultados clasificados como positivoso negativos se compararon utilizando el test de McNemar.Los %I de los sueros analizados en las placas del GA yGB fueron significativamente diferentes a los %I obtenidoscuando los mismos sueros fueron analizados en lasplacas del GD (P= 0,006 y P< 0,001, respectivamente). Ladiferencia también fue significativa cuando se compararonlos resultados positivos o negativos según el punto de corte(P< 0,001). En las placas del GA se afectó la sensibilidad(9 resultados falsos negativos) y en las placas del GBdisminuyó la especificidad (2 resultados falsos positivos).En cambio, no hubo diferencia significativa entre los %Ide los sueros analizados en las placas del GC y GD (P=0,673) y la concordancia en los resultados fue del 100 % (P=1). Los resultados obtenidos demuestran que la estrategiade conservación de las placas del GC: tapizado, bloqueo,sellado y envasado al vacío a 4ºC constituye una opción deconservación adecuada de las placas para su produccióny posterior distribución en formato de kits de diagnóstico.La posibilidad de almacenar placas de ELISA, permitirátransferir la técnica a otros laboratorios.