RELACIÓN RADICAL ASCORBILO/ ANION ASCORBATO (A●/AH¯) COMO INDICADOR DE ESTRÉS OXIDATIVO EN LARVAS DE APIS MELLIFERA EXPUESTAS A PAENIBACILLUS LARVAE

MOLINÉ, M. P.; AGUIRRE M.; DOMINGUEZ, E.; FERNADEZ, N.; DAMIANI, N.; CHURIO, M. SANDRA; GENDE, L.

Encuentro; biologos en red 2022; 2022

Recientemente se ha explorado la relación radical ascorbilo/anión ascorbato (A●/AH¯) como indicio de estrés oxidativo, entendido éste como la sobreproducción de especies reactivas de oxígeno (EROS) o una deficiencia en la capacidad antioxidante de un organismo. Cuanto mayor es dicha relación más grande se considera el estrés sufrido. Paenibacillus larvae es una bacteria productora de esporas que causa la enfermedad bacteriana Loque americana (LA) en larvas de Apis mellifera. P. larvae destruye el epitelio intestinal e induce al sistema inmune lo que puede causar el estrés oxidativo. En este trabajo se midió la relación A●/AH¯ en larvas al final de su estadio, inoculadas in vitro con una dosis subletal (DL25) de esporas de P. larvae. Los valores de DL50 de tres aislamientos bacterianos fueron previamente determinados (N15: 1,89 esporas/µl; Típica: 20,26 esporas/µl; L33: 56,03 esporas/µl). Las dosis fueron incorporadas en el alimento larval el primer día y se continuó la alimentación de acuerdo a la dieta de Aupinel y col. (2005). El radical ascorbilo A● fue detectado mediante resonancia paramagnética electrónica (EPR), resultando su cantidad invariable en larvas inoculadas respecto de no inoculadas. Mientras que el anión AH¯ fue cuantificado por cromatografía líquida de alta performance (HPLC), donde se evidenció un incremento estadísticamente significativo en larvas inoculadas con L33, Típica y N15, en relación a las larvas control (pasando de 10,4 ± 3,7 µM en estas últimas a 20,6 ± 1,5; 16,7 ± 4,5 y 13,1 ± 0.9 µM, respectivamente). Como resultado, la relación A●/AH¯ presentó un valor menor estadísticamente significativo en larvas inoculadas con L33 (0,11 ± 0,01) y con Típica (0,07 ± 0,03 UA) comparado con sus respectivos controles (0,26 ± 0,11 UA; 0,12 ± 0,05 UA). Sin embargo, la diferencia no fue significativa en larvas inoculadas con N15. La relación A●/AH¯ indicó menor estrés oxidativo en larvas expuestas a P. larvae, frente a las que no, de acuerdo a la virulencia (DL50) de cada cepa (L33 > Típica > N15). Esto podría asociarse a un estimulado en el reciclaje del anión AH¯ de las larvas como un mecanismo de defensa antioxidante.