Caracterización del efecto in vitro del ácido Nordihidroguayarético sobre Dengue virus tipo 1.

MARTINEZ, F.; AGUILAR, J.; CONTIGIANI, M.; NUÑEZ MONTOYA, S.C.; KONIGHEIM, B.

Valle Hermoso, Córdoba

Jornada; XXXVIII Reunión Científica Anual; 2018

Sociedad Argentina de Virología

Larrea divaricata Cav. (Zygophyllaceae), conocida popularmente como ?jarilla? posee reconocida importancia en la medicina tradicional de nuestro país. El ácido nordihidroguayarético (ANDG) es el compuesto mayoritario y biológicamente activo que posee esta especie. Previamente, evaluamos la actividad antiviral y virucida in vitro del ANDG sobre diferentes arbovirus. Dado el efecto producido sobre el virus Dengue tipo 1 (DENV-1), con una concentración efectiva 50 de 13,84 μM, se planteó caracterizar el efecto virucida in vitro del ANDG y suacción en diferentes momentos de la infección con DENV-1. Se caracterizó la actividad virucida a distintos tiempos y temperaturas. DENV-1 se pre-incubó con ANDG (115 μM) durante 15, 30, 45 y 60 min a 37°C y 60 min a 4°C. Luego, diluciones seriadas 1/10 se sembraron sobre células LLC-MK2. Para valorar la potencia antiviral, las células se infectaron sincronizando la infección con diferentes índices de multiplicidad (MOI): 0,015; 0,075; 0,15; 1,5; y se incubaron con medio semisólido conteniendo 90 μM de ANDG. Por otro lado, se agregó ANDG (90 μM) sobre monocapas de LLC-MK2 en distintos momentos: a) 60 min antes de la adhesión, b) durante la adhesión c) durante la adsorción viral d) durante la adsorción y luego junto con el medio semisólido 7 días, y e) en el medio semisólido pos-infección, 7 días. En todos los casos se incubó durante 7 días (37°C y 5% de CO2) y se incluyeron controles de célula, compuesto y virus (n=3). La evaluación de la inhibición viral (%I) se realizó utilizando la prueba de reducción de UFP. Se demostró que el efecto virucida in vitro de ANDG sobre DENV-1 es diferente a las temperaturas ensayadas (4°C y 37°C), siendo inactivo a 4°C y directamente proporcional al tiempo de incubación a 37°C. Así, la mayor actividad (disminución de 3 log de UFP) se logró incubando a 37°C durante 60 min. Este resultado resalta la importancia de estudiar la cinética de inhibición, mostrándonos las condiciones en donde el compuesto es activo. En cuanto a la potencia antiviral del ANDG, se observó que fue capaz de inhibir completamente las partículas virales, independientemente de la MOI. Además, se estableció que el ANDG interviene principalmente cuando se lo adiciona en el medio semisólido y permanece presente durante los 7 días de incubación(83%I). Estos resultados indican que el ANDG actúa también intracelularmente y sugiere que es activo principalmente en las etapas tardías del ciclo de replicación viral, sin afectar los primeros pasos de este ciclo. La bioactividad del ANDG sobre DENV-1 reviste una relevante importancia sanitaria, ya que las infecciones por este virus no poseen un tratamiento terapéutico; y la vacuna no ha sido aprobada en nuestro país. Así, la caracterización de la actividad antiviral del ANDG sobre el DENV-1, justificaría continuar trabajando para evaluar el mecanismo de acción por el cual este compuesto inhibe el DENV-1.