Utilización de baculovirus recombinantes para delivery génico en células de cáncer de mama triple negativo

GOMEZ BERGNA, SANTIAGO; ABRIL MARCHESINI; GOTTARDO, MARÍA FLORENCIA; ROMANOWSKI, VÍCTOR; PIDRE, MATÍAS LUIS

Congreso; XXXIX Reunión científica anual de la sociedad argentina de virología; 2019

El desarrollo y utilización de estrategias de terapiagénica para el tratamiento de enfermedades noinfecciosas se ha incrementado en los últimos años. Losvectores virales son muy utilizados para este fin debidoa que tienen la capacidad de ingresar en células demamífero y conducir a la expresión de genesheterólogos. En particular, el baculovirus Autographacalifornica Multiple Nucleopolyhedrovirus (AcMNPV),es un virus patógeno de insectos que es capaz detransducir células de mamífero sin producir virionesinfectivos.El cáncer de mama triple negativo (TNBC) es unaneoplasia maligna caracterizada por la ausencia de laexpresión de los receptores de estrógeno,progesterona y HER2. Estos tumores son muy agresivosy poseen una alta tasa de recurrencia. Además, puedengenerar resistencia a la quimioterapia y la radioterapia.Diferentes trabajos demostraron que la sobreexpresiónde miembros de la familia de proteínas inhibidoras dela apoptosis (IAP) es responsable de dicha resistencia.En particular, la proteína BIRC6 es el miembro másgrande de esa familia (528 kDa) y su rol en TNBC seencuentra poco estudiado.En nuestro laboratorio, se generó un baculovirusrecombinante que expresa un shRNA complementarioa la región 3?UTR del gen birc6 humano, y que ademásconduce a la expresión de la proteína reporteradTomato en células de mamífero.Los objetivos de este trabajo consistieron en evaluar lacapacidad de los baculovirus recombinantes detransducir células de carcinoma mamario triplenegativo murino (F3II) y humano (MDA-MB-231),optimizar el protocolo de transducción, y evaluar elefecto del silenciamiento de BIRC6 sobre las célulasutilizadas.Para ello, se incubaron las líneas celulares condiferentes cantidades de partículas baculovirales, con osin el agregado de polietilenimina. Se evaluó laeficiencia de transducción mediante la expresión de laproteína dTomato.Posteriormente, se evaluaron los niveles de apoptosisinducida por la transducción viral, mediante la técnicade TUNEL. Se evidenció el silenciamiento de la proteínaBIRC6 mediante inmunofluorescencia indirecta.Se observaron células fluorescentes luego de laincubación con el baculovirus recombinante, productode la transducción en las diferentes lineas celulares.Además, se observó una diferencia estadísticamentesignificativa en los niveles de apoptosis inducidos en lascélulas transducidas con el baculovirus silenciador encomparación con las transducidas con un baculoviruscontrol. Por último, se observó mediante microscopíaconfocal una disminución en los niveles de expresiónde BIRC6 en aquellas células efectivamentetransducidas con el baculovirus silenciador.Estos resultados indican que las células de carcinomamamario triple negativo murino y humano sonpermisivas para la transducción mediada porbaculovirus. Además, el baculovirus recombinantegenerado fue capaz de silenciar la expresión de BIRC6tanto en células humanas como murinas e inducirapoptosis.