Endosimbiontes obligados (yeast-like symbionts) del vector Delphacodes kuscheli (Hemiptera: Delphacidae). Cultivo e identificación

BRENTASSI, MARIA E.; TOLEDO, ANDREA V.; MEDINA, ROCIO; DE LA FUENTE, D; FRANCO, MARIO EMILIO ERNESTO; BALATTI, PEDRO A.

Mendoza

Congreso; X Congreso Argentino de Entomología; 2018

Sociedad Argentina de entomología

Los hemípteros delfácidos incluyen a especies vectoras de enfermedades a cereales. Estos insectosestablecen asociaciones simbióticas obligadas con organismos conocidos como yeast-like symbionts(YLS) (Fungi) que complementan sus dietas nutricionalmente desbalanceadas (savia floemática).Los YLS se transmiten transováricamente y son indispensables para el desarrollo de estos insectos.En estudios previos realizados en Delphacodes kuscheli, principal vector del Mal de Río Cuarto delmaíz en Argentina, se identificaron organismos morfológicamente similares a los YLS en el tejidograso abdominal y en los huevos. El objetivo de este trabajo fue aislar endosimbiontes cultivables invitro e identificarlos en base a características morfológicas y a secuencias de su genoma. Los YLS seobtuvieron a partir de huevos extraídos desde posturas endofíticas, esterilizados superficialmentecon alcohol 70% e hipoclorito de sodio al 0.5%, y macerados con micropistilos estériles en agua destiladaestéril. Alícuotas de las suspensiones se sembraron en placas de Petri conteniendo medios de cultivoSabouraud dextrosa agar enriquecido con 1% de extracto de levaduras (SDAY 1%), agar extracto demalta 2% (AEM 2%), agar sacarosa con el agregado de 4% de harina de amaranto (AS amaranto4%), y agar sacarosa con el agregado de 4% de harina de chía (AS chía 4%). Luego de un período deincubación de 4 días a 25 y a 28 °C se desarrollaron colonias que fueron caracterizadas morfológicay molecularmente, y preservadas a 4 °C. Cuatro colonias puras de YLS que desarrollaron en mediosSDAY y AEM se caracterizaron con marcadores ISSR (primers AA5, FA5 y LA5) registrándose dospatrones de bandas diferentes. A un representante de cada perfil genético encontrado se lo identificóamplificando y secuenciando el ITS (ITS5 e ITS4). La amplificación generó dos fragmentos de ADNde 560 pb cuyas secuencias presentaron 100% de similitud con Naganishia diffluens (=Cryptococcusdiffluens) (Basidiomycota, Tremellomycetes). El género Cryptococcus ha sido descripto como un CrypLikeSymbiote en Nilaparvata lugens, delfácido plaga del arroz en Asia. La metodología utilizada eneste trabajo permitió cultivar e identificar por primera vez a un endosimbionte del tipo YLS aisladoa partir de D. kuschel