FENOTIPO RHMOD: PRIMER CASO REPORTADO EN ARGENTINA

MUFARREGE, NICOLÁS; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; PRINCIPI, CINTIA; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; MATTALONI, STELLA MARIS; ENSINCK, MARÍA ALEJANDRA; GARCIA BORRAS, SILVIA; BIONDI, CLAUDIA; COTORRUELO, CARLOS

Congreso; XXI Congreso y la XXXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2019

El sistema de grupo sanguíneo RH es el más complejo y polimórfico. Sus antígenos -D y C/c, E/e- están codificados por dos genes altamente homólogos y estrechamente vinculados: RHD y RHCE, respectivamente. Existe un sinnúmero de fenotipos variante producto de la expresión aberrante de uno o más antígenos Rh. Los fenotipos de deficiencia de Rh, Rhnull o Rhmod, carecen o presentan una expresión muy reducida de los antígenos Rh, respectivamente. El fenotipo Rhnull surge de dos eventos moleculares diferentes que dan lugar al tipo amorfo y al tipo regulador. El primero es producto de mutaciones inactivadoras en RHCE y deleción de RHD. El último, así como el fenotipo Rhmod surgen debido a mutaciones homocigotas (o doble heterocigotas) en RHAG, el gen que codifica para RhAG, la glicoproteína asociada al complejo Rh. Una RhAG funcional es esencial tanto para el correcto ensamblaje del complejo Rh como para la expresión de los antígenos Rh en la membrana eritrocitaria. Ambos fenotipos deficientes presentan expresión reducida de otros antígenos de grupos sanguíneos así como también de glicoproteínas como CD44. El objetivo de este trabajo fue realizar un estudio serológico y molecular de la muestra de una paciente con ningún antígeno Rh detectado por métodos serológicos estándares que fue remitida al Laboratorio de Inmunohematología. El fenotipo Rh completo ?antígenos D, C, c, E y e- fue analizado mediante técnicas de hemaglutinación en tubo utilizando anticuerpos monoclonales específicos. Además, los antígenos D, C y e fueron evaluados por adsorción ? elución. La expresión de la glicoproteína RhAG fue estudiada mediante aglutinación directa utilizando un anti-RhAG humano (clon LA1818). La expresión de CD44 fue determinada por citometría de flujo utilizando un anti-CD44 humano conjugado a ficoeritrina (clon B6H12). El ADN genómico fue aislado usando un método salting-out modificado. La presencia de fragmentos del gen RHD fue evaluada a través de una estrategia de PCR multiplex. El genotipo RHCE fue determinado mediante PCR específicas para los alelos RHC/c y RHE/e. Finalmente, el gen RHAG fue investigado mediante amplificación por PCR específica de exones y secuenciación de Sanger. Ningún antígeno Rh fue detectado por el método de hemaglutinación estándar en tubo, mientras que por la técnica especializada de adsorción ? elución, fueron detectados los antígenos D y C. Los glóbulos rojos (GRs) de la paciente aglutinaron cuando fueron enfrentados al anti-RhAG indicando la presencia de RhAG en la membrana eritrocitaria. Se observó una reducción del 85% de la expresión de CD44 en los hematíes de la paciente con respecto a GRs normales. La estrategia de PCR multiplex evidenció que la muestra resultó portadora de secuencias génicas RHD específicas. Además mediante PCR-SSP fueron detectados los alelos RHC y RHe. El análisis de secuenciación permitió la detección del polimorfismo c.920T>C en el Exón 6 del gen RHAG. Esta mutación es responsable de la sustitución aminoacídica p.Ser307Phe que se encontraría en el décimo segmento transmembrana de la glicoproteína RhAG. Todos estos hallazgos permiten concluir que la paciente es portadora de un fenotipo Rhmod, y que la mutación de cambio de sentido en RHAG responsable de la correspondiente sustitución aminocídica en la glicoproteína RhAG parece ser crítica para el correcto ensamblaje del complejo Rh y la expresión de los antígenos Rh en la membrana eritrocitaria.