ESTUDIO DE LAS BASES MOLECULARES RESPONSABLES DE UN FENOTIPO D VARIANTE

LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; PRINCIPI, CINTIA; MUFARREGE, NICOLÁS; MATTALONI, STELLA MARIS; ENSINCK, MARÍA ALEJANDRA; GARCIA BORRAS, SILVIA; BIONDI, CLAUDIA; COTORRUELO, CARLOS

Rosario

Congreso; XXI Congreso y la XXXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2019

Sociedad de Biología de Rosario

El locus RH está formado por los genes RHD y RHCE que codifican proteínashomónimas localizadas en la membrana eritrocitaria. Ambos genes comparten una altahomología y albergan numerosos elementos repetitivos que pueden servir como sitiospara la recombinación, dando lugar a alelos nuevos. Los polipéptidos Rh expresannumerosos antígenos, de los cuales el epitope D es el más inmunogénico,constituyéndolo en uno de los antígenos más importante en medicina transfusional yobstétrica. La determinación serológica del fenotipo D se realiza en base a técnicasestandarizadas de hemaglutinación. Frecuentemente estas metodologías permitenidentificar fenotipos D variantes como resultados de reacciones de aglutinaciónantígeno-anticuerpo fuertemente positivas antes de los 10 segundos o débilmentepositivas posteriores a los 120 segundos. Las estrategias de biología molecular permitencaracterizar las bases genéticas responsables de la expresión alterada del antígeno D. Elobjetivo de este trabajo fue analizar la expresión de los antígenos D, C, c, E y e delsistema Rh e identificar las bases moleculares responsables de un fenotipo conexpresión exacerbada del antígeno D. Se estudió una muestra de sangre periféricaperteneciente a una mujer de 35 años. Para el estudio del antígeno D se realizó latipificación de rutina en placa con un anticuerpo anti-D mezcla de anticuerposmonoclonales humanizados IgM/IgG (Blend) (clones TH-28- secretor de IgM y MS-26-secretor de IgG). Se observó una reacción fuertemente positiva (intensidad 4+, únicoaglutinado) antes de los 2 segundos de iniciada la reacción. Se estudiaron los antígenosC, c, E y e mediante técnicas de aglutinación en columnas de gel SEPADEX Gconteniendo anticuerpos monoclonales provenientes de distintas líneas celulares: anti-C(clones MS-24, MS-273, P3x25513G8), anti-Cw (clon MS-110), anti-c (clon MS-33,951), anti-E (clon MS-260, MS-80, MS-258), anti-e (clones MS-16, MS-21, MS-63,MS-62, P3GD512). Se investigó la estructura molecular de los genes RHD y RHCE porestrategias de biología molecular basadas en PCR-SSP y PCR-RFLP. Los estudios demicro tipificación en gel no detectaron expresión de los antígenos C, c, E ni e. Seidentificaron SNPs RHCE específicos correspondientes al exón 1, 2, 9 y a la región3´UTR, sugiriendo que la muestra en estudio sería portadora de una estructura alélicahíbrida RHCE(1-2)-D(3-8)-CE(9-10) en estado homocigota. Probablemente, a causa deun evento de conversión génica entre secuencias homólogas de los genes RHD y RHCE,un segmento de ADN de un alelo RHD se ha insertado en un alelo RHCE. La presenciade secuencias RHD específicas a lo largo de casi toda la nueva estructura recombinantesería la responsable de la elevada expresión del antígeno D detectada en la muestra de lapaciente portadora de esta variante alélica. La detección de estas variantes D es defundamental importancia en hemoterapia ya que permite decidir la conductatransfusional y obstétricas adecuadas.