Estudio molecular del fenotipo D variante en embarazadas del Centro Regional de Hemoterapia de Rosario

MUFARREGE, NICOLÁS; SOBOLEOSKY, MOIRA; STETTLER, SILVINA; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; NICOLORICH, MARIA VIRGINIA; REDONDO, PAOLA; FORCONI, MIRKO; BONETTI, SOFIA; ACOSTA, ANDREA; FORNES, CLAUDIA; COTORRUELO, CARLOS

Buenos Aires

Congreso; XVII CONGRESO ARGENTINO DE MEDICINA TRANSFUSIONAL; 2019

Asociación Argentina de Hemoterapia e Inmunohematología

Fundamento: el fenotipo D variante (Dvar) se caracteriza por una expresión débil del antígeno D y es reconocido serológicamente a través de reacciones de hemaglutinación con antisueros anti-D que presentan intensidades menores a 3+. Algunos fenotipos Dvar son detectados solo en fase antiglobulina. La disminución en la expresión del antígeno D puede deberse a variaciones cualitativas (fenotipo D parcial) o cuantitativas (fenotipo D débil) de la proteína RhD, sin embargo, en la mayoría de los casos no es posible realizar esta discriminación con técnicas serológicas siendo necesario recurrir a métodos de biología molecular. Actualmente se considera que las embarazadas con expresión débil del antígeno D, son susceptibles de desarrollar una respuesta inmunológica luego de la exposición a glóbulos rojos D positivo. Sin embargo, numerosos estudios clínicos han demostrado que los pacientes con fenotipo Dvar originado por los alelos D débil tipo 1, D débil tipo 2 y D débil tipo 3, no producen anticuerpos anti-D. Objetivo: el objetivo de este trabajo fue caracterizar a nivel molecular las muestras de embarazadas con expresión débil del antígeno D que fueron estudiadas en el Centro Regional de Hemoterapia de Rosario en los últimos 24 meses. Material y Métodos: se analizaron 65 muestras de sangre entera pertenecientes a embarazadas con fenotipo Dvar detectado en fase antiglobulina o por una reacción débil de hemaglutinación en medio salino. Se determinó el fenotipo Rh completo utilizando anticuerpos monoclonales específicos anti-C, anti-c, anti-E y anti-e. Se obtuvo ADN genómico a través del método de adsorción-desorción sobre membranas de sílica. Se analizó por una estrategia de PCR multiplex la presencia del gen RHD. Se investigó la presencia de alelos D variantes por técnicas de PCR alelo específicas. Resultados: los estudios moleculares permitieron determinar que el 67,7% de las muestras (n=44) con fenotipo Dvar portaban los alelos D débil tipo 1 (n=9; 13,8%), D débil tipo 2 (n=28; 43,1%) y D débil tipo 3 (n=7; 10,8%). El 32,3% de las muestras analizadas (n=21) resultaron portadoras de alelos D parciales (D débil tipo 4 (n=15; 23,1%), RHD*359A (n=5; 7,7%) y D débil tipo 59 (n=1; 1,5%)). Se observó también que los alelos D débil tipo 1, D débil tipo 3 y D débil tipo 59 estaban asociados a la expresión del antígeno C, los alelos D débil tipo 2 y RHD*359A a la expresión del antígeno E mientras que el alelo D débil tipo 4 se asoció al fenotipo ccee. Conclusiones: los hallazgos obtenidos permiten concluir que en la población en estudio, más del 50% de las embarazadas con una expresión débil del antígeno D podrían ser considerados D positivas. Teniendo en cuenta que las pacientes embarazadas con fenotipo Dvar portadores de alelos D débil tipo 1, D débil tipo 2 y D débil tipo 3 no son susceptibles de desarrollar anticuerpos anti-D, la caracterización molecular del fenotipo Dvar permite una optimización del uso de la profilaxis con inmunoglobulina anti D. En el período analizado se evitó la aplicación innecesaria de 44 dosis de la inmunoglobulina anti D prenatal y aproximadamente 37 dosis posparto en aquellas mujeres cuyos hijos resultaron RhD positivos. Además, la caracterización molecular del fenotipo Dvar resulta útil para evitar el uso innecesario de unidades RhD negativas en el caso de que estas pacientes requieran transfusiones.