Fenotipo D parcial causado por una nueva mutación sin sentido

MUFARREGE, NICOLÁS; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; PUPPO, M; ABATEMARCO, V; IZAGUIRRE, S; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; MATTALONI, STELLA MARIS; BIONDI, CLAUDIA; KUPERMAN, S; COTORRUELO, CARLOS

Congreso; XVI Congreso Argentino de Medicina Transfusional; 2017

Fundamento: la identificación de expresiones aberrantes del antígeno D (fenotipo Dvar) es de fundamental importancia en hemoterapia para optimizar la compatibilidad transfusional y en obstetricia para definir estrategias de intervención médica en embarazadas. En la mayoría de los casos, las determinaciones serológicas no permiten resolver la complejidad fenotípica del sistema Rh y en este contexto los estudios a nivel del ADN resultan apropiados para superar estas limitaciones.Objetivo: el objetivo de este trabajo fue caracterizar las bases moleculares de dos muestras con fenotipo Dvar de donantes de sangre del Centro Regional de Hemoterapia - Hospital de Pediatría Prof. Dr. Juan P. Garrahan.Materiales y Métodos: se determinó el fenotipo Rh completo por técnicas de hemaglutinación en gel utilizando anticuerpos monoclonales. Además, la expresión del antígeno D fue estudiada por técnicas en tubo utilizando anticuerpos monoclonales IgM e IgG y el kit ID-Partial RhD Typing Set. Se realizó el estudio molecular de la cigosidad RHD mediante PCR-RFLP. Se investigó la presencia de variantes alélicas D débiles y se analizaron los polimorfismos asociados a los 10 exones del gen RHD por PCR-SSP. Finalmente, se realizaron estudios de secuenciación.Resultados: los estudios serológicos mostraron un fenotipo Dvar, C+, c-, E-, e+ para la muestra #1 y Dvar, C+, c+, E-, e+ para la muestra #2. En ambos casos se identificó el fenotipo D parcial DFR utilizando el kit ID-Partial RhD Typing Set. Se detectó una caja de Rhesus híbrida en cada muestra, indicando un estado RHD hemicigota. Los estudios de secuenciación revelaron un nuevo alelo producto de la mutación puntual 325A>G en el exón 2 del gen RHD.Conclusiones: la mutación puntual detectada es responsable del cambio aminoacídico Thr109Ala localizado en el límite extracelular del cuarto segmento transmembrana de la proteína RhD. Si bien los estudios serológicos identificaron un fenotipo DFR, las bases moleculares halladas son diferentes a las que presentan los alelos DFR-1, DFR-2, DFR-3, DFR-4 y DFR-5 descritos hasta el momento. Mientras que estas variantes resultan de estructuras híbridas que implican el exón 4 del gen RHD (y el exón 3 en DFR-5), una mutación puntual en el exón 2 es responsable de las variantes informadas en este trabajo. Los resultados serológicos y moleculares sugieren una asociación genética en cis entre esta nueva variante RHD y el alelo RHCe. La genotipificación RHD puede contribuir a la toma de decisiones clínicas en las transfusiones y proporcionar recomendaciones adecuadas para la profilaxis anti-D en los embarazos.