ESTUDIO DE LA VARIABILIDAD GENÉTICA EN FENOTIPOS D VARIANTEESTUDIO DE LA VARIABILIDAD GENÉTICA EN FENOTIPOS D VARIANTE

MUFARREGE, NICOLÁS; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; MATTALONI, STELLA MARIS; ENSINCK, MARÍA ALEJANDRA; GARCIA BORRAS, SILVIA; BIONDI, CLAUDIA; COTORRUELO, CARLOS

Congreso; XIX Congreso y XXXVII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2017

El sistema Rh presenta un gran interés clínico en medicina transfusional y en obstetricia, debido a la participación de sus anticuerpos en los procesos de destrucción inmune de los glóbulos rojos. El antígeno D puede presentar variaciones en su expresión que en conjunto se denominan fenotipo D variante (Dvar). Este fenotipo se manifiesta a través de una intensidad reducida en las reacciones de hemaglutinación con antisueros anti-D. Algunos fenotipos Dvar son detectados en fase antiglobulina. Actualmente se considera que los pacientes con expresión débil del antígeno D desarrollan una respuesta inmunológica luego de la exposición a glóbulos rojos D positivo. Sin embargo, numerosos estudios clínicos han demostrado que los individuos con fenotipo Dvar originado por los alelos D débil tipo 1, D débil tipo 2 y D débil tipo 3, no producen anticuerpos anti-D. La caracterización de fenotipos variantes del antígeno D permitirá decidir la conducta transfusional adecuada en los Bancos de Sangre y definir estrategias de intervención médica en las embarazadas. El objetivo de este trabajo fue estudiar las bases moleculares responsables del fenotipo Dvar en muestras de pacientes de nuestra ciudad y derivadas de diferentes efectores de salud de nuestro país. Se analizaron 71 muestras de sangre periférica con fenotipo Dvar provenientes de pacientes de Rosario (n=24), Tucumán (n=32) y CABA (n=15). Se estudió el fenotipo Rh completo mediante técnicas de hemaglutinación en tubo utilizando anticuerpos monoclonales IgM e IgG. Se obtuvo ADN genómico por el método de salting-out. El estudio molecular de la cigosidad RHD fue realizado mediante PCR-RFLP. La presencia de las variantes alélicas D débiles y los polimorfismos asociados a los 10 exones del gen RHD fueron investigados por estrategias de PCR-SSP. Los estudios moleculares permitieron determinar los siguientes alelos: D débil tipo 1 (n=12), D débil tipo 2 (n=25), D débil tipo 3 (n=5), D débil tipo 4 (n=14), RHD*359C>A (n=10), RHD*DVI tipo 2 (n=1) y RHD*DVI tipo 4 (n=4). El 59,15% del total de las muestras portaron los alelos D débiles tipo 1, tipo 2 y tipo 3. Más del 80% de las muestras provenientes de la región central del país (Rosario y CABA) correspondieron a estas variantes alélicas, mientras que en la región de Tucumán estudiada el porcentaje correspondiente a las mismas fue del 31,25%. Teniendo en cuenta el elevado porcentaje de individuos Dvar portadores de alelos D débil tipo 1, tipo 2 y tipo 3 en nuestra población, la caracterización molecular de este fenotipo permitirá evitar el malgasto de las unidades D negativas en los bancos de sangre, y administrar racionalmente la profilaxis con inmunoglobulina anti-D en las pacientes embarazadas. El estudio molecular del locus RH resulta importante para desarrollar estrategias de tipificación de ADN confiables, que permitan realizar la genotipificación RHD prenatal y optimizar la selección de unidades a transfundir, asegurando la sobrevivida de los eritrocitos transfundidos. La diferencia en los porcentajes de los alelos observados en las distintas regiones estudiadas refuerza la hipótesis que la distribución de los alelos del sistema Rh varía en las diferentes regiones de la Argentina producto de los diversos aportes que realizaron las distintas etnias que poblaron nuestro país.