Relación genotipo-fenotipo del sistema Rh: investigación de alelos silentes

TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; BIANCHINI, PABLO; BIONDI, CLAUDIA; GARCIA BORRAS, SILVIA; DI MÓNACO, RENE; RACCA, AMELIA; COTORRUELO, CARLOS

Rosario, Santa Fe

Jornada; VI Jornada de Ciencia y Tecnología; 2012

Universidad Nacional de Rosario

El fenotipo RhD negativo en la población caucásica es causado por una deleción completa del gen RHD. Sin embargo, han sido reportadas regiones específicas de este gen en individuos RhD negativo de diferentes grupos étnicos. El objetivo de este trabajo fue investigar la presencia de alelos RHD silentes en pacientes RhD negativo que concurrieron al Hospital Provincial del Centenario. Se tipificaron 12672 individuos y se seleccionaron las muestras RhD negativo halladas. Se determinó el fenotipo Rh completo y posteriormente se investigó la presencia del gen RHD utilizando una estrategia de PCR multiplex. En las muestras que presentaron fragmentos RHD específicos se aplicó un algoritmo de reacciones de PCR para identificar el alelo presente. Las muestras no caracterizadas fueron analizadas por secuenciación. Se encontraron 652 (5.15%) muestras RhD negativo. Cincuenta y cinco (8.42%) presentaban al menos el antígeno RhC o RhE. Los estudios moleculares permitieron detectar 15 alelos silentes: 7 RHDψ, 6 híbridos RHD-CE(3-7)-D, 2 híbridos RHD-CE(3-9)-D y 1 alelo nuevo denominado RHD(46 T>C). La muestra portadora de esta nueva variante alélica fue estudiada posteriormente con diferentes clones de anticuerpos anti-D y por técnicas de adsorción-elusión. Los resultados mostraron que el nuevo polimorfismo encontrado es responsable de un fenotipo con expresión muy débil del antígeno D. La frecuencia de individuos RhD negativo en la población estudiada fue significativamente menor a la reportada en caucásicos. Los resultados moleculares obtenidos indican que 2.45% (16/653) de los individuos que serológicamente resultan RhD negativo son portadores de variantes alélicas RHD. Los alelos RHD-CE(3-7)-D, RHD-CE(3-9)-D y RHD(46 T>C) están presentes únicamente en individuos RhD negativo que expresan los antígenos RhC y/o RhE con una frecuencia del 16.36% (9/55). Por otro lado, el alelo RHDψ está asociado exclusivamente al fenotipo dccee, siendo el 1.17% (7/598) de estos individuos portadores del pseudogen RHDψ. Estos hallazgos señalan la importancia del estudio del polimorfismo molecular del locus RH para el desarrollo de estrategias de tipificación de ADN confiables, que permitan realizar la genotipificación RHD prenatal y optimizar la selección de unidades a transfundir en los Bancos de Sangre