Genotipificacion RHD fetal en plasma materno

TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; BIANCHINI, PABLO; DI MÓNACO, RENE; RACCA, AMELIA; COTORRUELO, CARLOS

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Medicina Transfusional y del VII Congreso del Grupo Cooperativo Iberoamericano de Medicina Transfusional; 2011

Asociación Argentina de Hemoterapia e Inmunohematología

Fundamento: la profilaxis con inmunoglobulina anti-D se administra de rutina a todas las mujeres embarazadas RhD negativas para evitar la formación de aloanticuerpos, siendo incluidas en este tratamiento las gestantes cuyos fetos son RhD negativos. Recientemente se ha demostrado la presencia de ADN fetal libre en el plasma de las mujeres embarazadas. Objetivo: el objetivo de este trabajo fue implementar una estrategia de PCR en tiempo real para la determinación no invasiva del genotipo RHD fetal a partir de una muestra de plasma materno. Materiales y Métodos: se estudiaron 54 muestras de sangre periférica de mujeres RhD negativas con embarazo único (rango de gestación 17 a 35 semanas), que concurrieron al Servicio de Obstetricia del Hospital Provincial del Centenario. El ADN fue extraído de 800 |a.L de plasma materno por adsorción en membranas de sílica gel y posterior elución. El genotipo RHD fetal fue determinado con una estrategia de PCR en tiempo real. Se utilizaron cebadores para amplificar una región del exón 7 y una región del exón 10 del gen RHD y sondas fluorogénicas marcadas con VIC (exón 7) y FAM (exón 10). También se amplificó un fragmento del gen SRVy se utilizó para su detección una sonda marcada con VIC, para confirmar el origen fetal del ADN obtenido. El exón 7 fue amplificado en un sistema de PCR monoplex mientras que se utilizó una PCR dúplex para estudiar el exón 10 y el gen SRY Posteriormente se determinó el fenotipo RhD en sangre de cordón de los recién nacidos por hemaglutinación. Resultados: se genotipificaron 43 muestras RHD positivas y 11 muestras RHD negativas. Se determinó la presencia del gen SRY en 24 muestras RHD positivas y en 9 muestras RHD negativas. El análisis del exón 7 permitió genotipificar fetos de madres portadoras del alelo r´s. Los resultados fueron coincidentes con el fenotipo RhD y el sexo del recién nacido. Conclusiones: estos hallazgos indican que la estrategia de PCR en tiempo real desarrollada permite realizar la genotipificación RHD a partir de ADN obtenido del plasma de mujeres embarazadas. Cuando todos los estudios moleculares fueron negativos no se pudo confirmar la presencia de ADN fetal. La genotipificación RHD fetal no invasiva contribuirá a racionalizar el uso de la profilaxis con inmunoglobulina anti-D permitiendo su administración exclusivamente a gestantes de fetos RhD positivos