BASES MOLECULARES DE UN FENOTIPO KELL NULO (K0)

MATTALONI, STELLA MARIS; LUJAN BRAJOVICH, MELINA; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; RUCCI, ANGEL; BIONDI, CLAUDIA; COTORRUELO, CARLOS

Rosario

Congreso; XVI Congreso y XXXIV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2014

Sociedad de Biología de Rosario

El sistema Kell es uno de los grupos sanguíneos más relevantes clínicamente, es altamente inmunogénico y sus anticuerpos participan en la patogénesis de la Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal y de reacciones hemolíticas post transfusionales. La glicoproteína Kell expresa 34 antígenos siendo los más importantes los epitopes K/k, Kpa/Kpb y Jsa/Jsb. La expresión combinada de estos antígenos está determinada por diferentes alelos del gen KELL. El objetivo de este trabajo fue investigar las bases moleculares de un fenotipo Kell nulo caracterizado por la ausencia de expresión de los epitopes del sistema Kell. Se estudió una muestra de sangre periférica de una paciente embarazada aloinmunizada con un anticuerpo panaglutinante, reactivo en fase antiglobulina, que reaccionaba con todos los glóbulos rojos del panel selector e identificador. Se realizó el fenotipo eritrocitario extendido por reacciones de hemaglutinación utilizando anticuerpos monoclonales específicos detectándose ausencia de expresión de los antígenos K/k, Kpa/Kpb y Jsa/Jsb. Estos resultados sugirieron que la especificidad del aloanticuerpo implicado era anti-Ku (dirigido contra todos los antígenos del sistema Kell). Para confirmar estos hallazgos se realizaron estudios de biología molecular. Se obtuvo ADN genómico a través del método de salting-out. Se realizaron técnicas de PCR-RFLP para detectar los polimorfismos característicos de los antígenos K, k, Kpa, Kpb, Jsa y Jsb, obteniéndose el genotipo kk-KpbKpb-JsbJsb. Debido a la discrepancia entre los hallazgos serológicos y moleculares se secuenciaron por la técnica de Sanger cada uno de los 19 exones del gen KELL y las regiones intrónicas adyacentes a cada uno de ellos. Se identificó una mutación puntual en el primer nucleótido del intron 3 (IVS3+1ga). La sustitución nucleotídica hallada se ubica en la región de corte y empalme del ARNm. El reemplazo de la secuencia conservada GT por AT sería responsable de un ensamblaje alternativo del ARNm con pérdida de secuencias exónicas que cambiarían el marco de lectura generando un codón de terminación de la transcripción prematuro. Los estudios moleculares permitieron determinar que los eritrocitos de la paciente no expresan la glicoproteína Kell en la membrana (fenotipo K0). La identificación de la mutación responsable de este fenotipo excepcional permitirá el desarrollo de una PCR alelo específica para detectar en el grupo familiar individuos portadores de este alelo y brindar un asesoramiento genético adecuado en lo que respecta a posibles aloinmunizaciones a través de terapias transfusionales y/o embarazos.