Caracterizacion fenotipica y genotipica de muestras RhD negativas

LUJAN BRAJOVICH, MELINA; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; BIONDI, CLAUDIA; GARCIA BORRAS, SILVIA; RACCA, AMELIA; COTORRUELO, CARLOS

Rosario, Santa Fe

Congreso; V Congreso y 9° Encuentro Bioquimico; 2009

Áreas Clínicas de los Departamentos de Bioquímica Clínica y Microbiología de la Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. UNR

En la mayoría de los individuos caucásicos el fenotipo RhD negativo es causado por una deleción completa del gen RHD siendo el haplotipo dce el más frecuentemente hallado. Sin embargo, se ha reportado la presencia de fragmentos del gen RHD en algunos individuos que no expresan el antígeno D. Los objetivos de este trabajo fueron establecer en individuos RhD negativos, la frecuencia de los antígenos C y E y analizar la presencia de genes RHD silentes. Se estudiaron 653 muestras RhD negativas obtenidas de dadores voluntarios con serología negativa, que concurrieron al servicio de Hemoterapia del Hospital Provincial del Centenario. Se determinó el fenotipo Rh por técnicas de hemaglutinación utilizando anticuerpos monoclonales anti-D, anti-C, anti-c, anti-E, y anti-e. Posteriormente se analizó la presencia del gen RHD mediante un sistema de PCR multiplex con cebadores que amplifican el intrón 4 y la región 3? no codificante del gen RHD. Las muestras positivas para alguno de los fragmentos RHD específicos fueron posteriormente estudiadas para determinar la estructura del locus RH por métodos de PCR alelo específica. De las 653 muestras RhD negativas analizadas, 55 (8,42%) presentaron al menos un antígeno C ó E (dCcee: 33, dccEe: 15, dCcEe: 6, dccEE: 1). El análisis por biología molecular permitió determinar al menos una de las regiones RHD específicas en 15 muestras (2,30%). Estudios posteriores permitieron caracterizar la estructura molecular de los alelos RHD silentes hallados. Se detectaron 7 muestras portadoras del pseudogen RHDΨ, 7 con alelos híbridos RHD/RHCE, y una con un gen RHD completo que presentaba una mutación puntual en el exón 1. El hallazgo de alelos RHD silentes en la población analizada, indican que el fenotipo RhD negativo no es causado exclusivamente por un proceso de deleción. La frecuencia de los antígenos C y E en las muestras RhD negativas, debe ser considerada en la selección de unidades a transfundir en los Bancos de Sangre de la ciudad de Rosario.