Investigacion del polimorfismo molecular del fenotipo D variante

TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; PERCARA, MARÍA LUCRECIA; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; BIONDI, CLAUDIA; COTORRUELO, CARLOS

Zavalla, Santa Fe

Congreso; XV Congreso y XXXIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2013

Sociedad de Biología de Rosario

El gen RHD codifica la proteína transmembranal RhD que expresa los epitopes del antígeno D del sistema Rh. Numerosas variantes alélicas son responsables de una expresión alterada del antígeno D (variante D) que se manifiesta a través de una intensidad reducida en la reacción de hemaglutinación con anti-D. Actualmente en los bancos de sangre, se considera que los pacientes con expresión aberrante de dicho antígeno, desarrollan una respuesta inmunológica luego de la transfusión de glóbulos rojos D positivo. Sin embargo, estudios recientes han demostrado que los receptores portadores de alelos D débiles tipo 1, tipo 2 y tipo 3, no producen anticuerpos anti-D. El objetivo de este trabajo fue investigar las bases moleculares responsables del fenotipo D variante en muestras de pacientes de nuestra ciudad y derivadas de diferentes efectores de salud del país. Se estudiaron 116 muestras provenientes de pacientes de Rosario (n=44), Tucumán (n=39), La Plata (n=14) y Córdoba (n=19). Se determinó el fenotipo Rh completo por técnicas de hemaglutinación utilizando anticuerpos monoclonales específicos. Se obtuvo ADN genómico a través del método de salting-out. Se analizó por una estrategia de PCR multiplex la presencia del gen RHD. Posteriormente, se amplificaron por PCR alelo específica cada uno de los diez exones del gen RHD, se investigó la presencia de las variantes alélicas D débiles tipo 1, 2, 3 y 4 y de la variante DVII. En las muestras no caracterizadas se secuenciaron los diez exones del gen RHD. Los estudios moleculares permitieron determinar que el 54,31% del total de las muestras portaban los alelos D débiles tipo 1, tipo 2 y tipo 3. En las regiones de Córdoba, La Plata y Rosario se observó que en más del 50% de las muestras, el fenotipo D variante es producto de dichos alelos. En Tucumán, la frecuencia de las variantes D débiles tipo 1, tipo 2 y tipo 3 es menor (28,20%) y se observó una mayor variabilidad alélica. Por otro lado, en las ciudades de Córdoba y Tucumán las muestras portadoras del alelo D débil tipo 4 representaron un porcentaje mayor que en Rosario y La Plata. Estos resultados sugieren que la distribución de los alelos del sistema Rh varía en las diferentes regiones de la Argentina. El predominio de alelos D débiles tipo 1, 2 y 3, característicos de caucásicos europeos, indicaría el mayor aporte de esta etnia al acervo genético de los individuos de la región central del país. Además, la presencia del alelo D débil tipo 4, de alta frecuencia en individuos africanos, fue superior en Tucumán y Córdoba sugiriendo una mayor influencia del África Subsahariana en esta población. La elevada variabilidad alélica observada en Tucumán podría explicarse por un mayor aporte amerindio. La detección molecular de las variantes D débil tipo 1, tipo 2 y tipo 3 permitirá un mejor manejo de la unidades D negativas y un uso racional de la profilaxis con IgG anti-D. El estudio molecular del locus RH resulta importante para desarrollar estrategias de tipificación de ADN confiables, que permitan realizar la genotipificación RHD prenatal y optimizar la selección de unidades a transfundir en los Bancos de Sangre.