Modelización de la estructura tridimensional una proteína RhD con expresión alterada de los epitopes D

TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; LARROQUE, CECILIA; RACCA, AMELIA; COTORRUELO, CARLOS

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LVII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y LX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2012

SAIC-SAI

El antígeno D está constituido por un mosaico de epitopes que se localizan en los dominios extracelulares de la proteína RhD. Los pacientes portadores de variantes cuantitativas no son susceptibles de desarrollar aloanticuerpos anti-D, en cambio los individuos que expresan variaciones cualitativas (ausencia de algunos epitopes) deben ser considerados RhD negativo para transfusiones o embarazos. El objetivo de este trabajo fue caracterizar a nivel molecular 5 muestras con expresión débil del antígeno D y establecer la estructura 3-D de la proteína RhD mutada. Se determinó el fenotipo Rh completo por hemaglutinación. Se evaluó la expresión del antígeno D con 16 reactivos monoclonales anti-D IgM, IgM/IgG e IgG. Se aplicaron técnicas de PCR SSP para detectar variantes alélicas del gen RHD. Posteriormente se secuenciaron los 10 exones de este gen. Los glóbulos rojos de las 5 muestras presentaron un patrón de reacción con los anticuerpos anti-D que no permitió obtener un mapeo preciso de los epitopes D. El fenotipo Rh completo de todas las muestras fue C-c+E+e+. Los estudios moleculares revelaron un nuevo polimorfismo caracterizado por la mutación puntual 359 C>A en el exón 3 responsable del cambio aminoacídico Ala120Asp. Posteriormente se desarrolló un modelo de la estructura 3-D de la proteína RhD utilizando un programa informático que permitió localizar la mutación en el 4º dominio transmembrana. Los resultados obtenidos indican que el alelo RHD(359C>A) origina una variante cuantitativa del antígeno D y muestran una asociación genética entre este nuevo polimorfismo RHD y el alelo RHcE. El cambio de un aminoácido apolar (Ala) por otro cargado (Asp) modificaría el ensamblaje del polipéptido en la membrana eritrocitaria disminuyendo, pero no suprimiendo, la expresión de los epitopes D. Los estudios realizados permiten identificar variantes cuantitativas del antígeno D y resultarían de utilidad para implementar una conducta transfusional u obstétrica adecuada.