ESTUDIO MOLECULAR DE UN FENOTIPO D - - EN UN DONANTE DE SANGRE

PRINCIPI, CINTIA; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; MATTALONI, STELLA MARIS; POSNER, VICTORIA; ENSINCK, MARÍA ALEJANDRA; BIONDI, CLAUDIA; COTORRUELO, CARLOS

ROSARIO

Congreso; XXIV Congreso y XLII Reunión Anual de la SBR 2022; 2022

SBR

El locus RH está constituido por dos genes homólogos RHD y RHCE que se encuentran dispuestos en tándem, comparten un 98% de homología entre sus secuencias y codifican dos proteínas (RhD y RhCE) de la membrana de los glóbulos rojos (GR). Se han descripto un gran número de variantes alélicas que se traducen en alteraciones en la expresión de los antígenos Rh y son de gran relevancia clínica en los procesos de aloinmunización. D - - es un fenotipo hereditario poco frecuente que se caracteriza por la ausencia de antígenos RhCE en la membrana eritrocitaria. Los individuos D - - están en riesgo de desarrollar un aloanticuerpo anti-Rh17, dirigido contra un antígeno Rh de alta frecuencia si son expuestos a GRs normales. Anti-Rh17 es de alto riesgo inmunológico ya que conduce a la destrucción inmune de los hematíes. La aloinmunización anti-Rh17 dificulta la obtención de sangre compatible y es responsable de Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal. El objetivo de este trabajo fue investigar las bases genéticas responsable de la falta de expresión de los antígenos C, c, E y e en un donante de sangre.Se investigó el fenotipo Rh con tarjetas comerciales de microcolumna de gel y por citometría de flujo. Se obtuvo ADN utilizando un kit de purificación comercial. Las variantes estructurales y de número de copias de exón se investigaron mediante PCR multiplex cuantitativa de fragmento fluorescente corto (QMPSF), utilizando cebadores fluorescentes para amplificar los 10 exones de ambos genes. Los amplicones se diferenciaron por tamaño mediante electroforesis capilar. Además, se realizaron estudios de secuenciación según el método de Sanger para identificar variantes de un solo nucleótido (SNV) y estrategias de PCR-RFLP para determinar la cigosidad del gen RHD.Los estudios serológicos mostraron reacciones de hemaglutinación positivas con el reactivo anti-D y negativas con los antisueros anti-C, anti-c, anti-E y anti-e. Además, los resultados de la citometría de flujo evidenciaron una sobreexpresión del 50% del antígeno D en comparación con las células de control positivo D y la ausencia total de los antígenos C, c, E y e. Los análisis de QMPSF mostraron la presencia de todos los exones RHD y RHCE. Los estudios de secuenciación permitieron identificar el SNV c.659G > A en el exón 5 del gen RHCE, que codifica un codón de terminación prematuro (p.W220Ter) y por lo tanto, una proteína RhCE trunca que no se integra en la membrana del GR. Los estudios de cigosidad mostraron que el gen RHD se encontraba en homocigosis. La presencia de un codón stop en la proteína RhCE no solo causa la pérdida de la expresión de los antígenos CE, sino también la sobreexpresión del antígeno D al liberar sitios en la membrana del GR, ya que los polipéptidos Rh se sintetizan en exceso y su contenido en la membrana está regulado por el de los otros miembros del complejo. La caracterización molecular de este fenotipo raro contribuye a una mejor comprensión del enorme polimorfismo asociado con el sistema de grupos sanguíneos Rh. Se brindó asesoría genética al donante en caso de requerir transfusiones a lo largo de su vida.