IDENTIFICACION DE ALELOS RHD MEDIANTE UNA ESTRATEGIA DE ANALISIS DE FRAGMENTOS FLUORESCENTES CORTOS

PRINCIPI, CINTIA; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; MATTALONI, STELLA MARIS; ENSINCK, MARÍA ALEJANDRA; BIONDI, CLAUDIA; COTORRUELO, CARLOS

Congreso; XXIII CONGRESOy XLI REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD DE BIOLOGIA DE ROSARIO; 2021

SBR

El gen RHD codifica para la proteína RhD que se expresa en la membrana plasmática del eritrocito. La presencia o ausencia del gen RHD en el ADN humano determina las bases moleculares del polimorfismo asociado a los fenotipos D positivo y D negativo. Diferentes mecanismos moleculares como inserciones, deleciones, sustituciones, duplicaciones nucleotídicas y fenómenos de conversión génica pueden alterar la expresión de los antígenos Rh. Las modificaciones genéticas mencionadas son responsables de más de 500 alelos RH, asociados generalmente a expresiones débiles, parciales o nulas de dichos antígenos. Las variantes alélicas RHD generan proteínas alteradas que pueden carecer de epitopes de alta incidencia y expresar variaciones cualitativas de los antígenos Rh, siendo los pacientes portadores susceptibles de desarrollar una aloinmunización postransfusional. El objetivo de este trabajo fue investigar las bases moleculares de alelos responsables de expresiones aberrantes del antígeno D y la estructura molecular de alelos nulos en donantes de sangre mediante una estrategia de análisis de fragmentos fluorescentes cortos por electroforesis capilar. Se analizaron 3 muestras de sangre periférica de donantes de sangre que presentaban una expresión débil del antígeno D y 5 muestras de donantes RhD negativos portadores del gen RHD. Se obtuvo ADN genómico a través del método de salting-out. Se realizaron reacciones de PCR multiplex con oligonucleótidos cebadores flourescentes de cada uno de los 10 exones de los genes RHD y RHCE. Posteriormente, los fragmentos obtenidos fueron diferenciados por tamaño mediante electroforesis capilar. El análisis de los electroferogramas permitió caracterizar los alelos híbridos RH-RHCE(3-9)-D (dos muestras), RH-RHCE(3-7)-D (dos muestras), RH-RHCE(3-5)-D (una muestra), RH-RHCE(5-9)-D (una muestra), RH-RHCE(4-6)-D (una muestra) y RHD*DELex8 (una muestra). Los alelos RHD*DELex8 (alelo DEL), RH-RHCE(3-9)-D, RH-RHCE(3-7)-D (alelos nulos) son responsables de un fenotipo D negativo, mientras que los alelos RH-RHCE(3-5)-D, RH-RHCE(5-9)-D, RH-RHCE(4-6)-D son responsables de un fenotipo D parcial. Esta nueva estrategia implementada es una metodología novedosa, confiable y al tratarse de un método automatizado disminuye el riesgo de error sistemático operador dependiente. Esto permitirá una mejor y más rápida caracterización de muestras con expresión aberrante del antígeno D.