Estudio de la estructura molecular del locus RH en individuos con alelos RHD híbridos

PRINCIPI, CINTIA; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; MATTALONI, STELLA MARIS; ENSINCK, MARÍA ALEJANDRA; BIONDI, CLAUDIA; COTORRUELO, CARLOS

Congreso; XXII Congreso y XL Reunión anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2020

SBR

El sistema Rh está codificado por los genes RHD y RHCE, los cuales se disponengenéticamente en tándem y comparten un 97% de homología. Los antígenos másinmunogénicos codificados por estos genes son D, C, c, E, e y desempeñan un papelcentral en las reacciones hemolíticas transfusionales, en la inmunización de pacientespolitransfundidos, en la patogénesis de la Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal y algunasAnemias Hemolíticas Autoinmunes. El gen RHD codifica para la proteína RhD que seexpresa en la membrana plasmática del eritrocito. La presencia o ausencia del gen RHDen el ADN humano determina las bases moleculares del polimorfismo asociado a losfenotipos D positivo y D negativo. Los individuos D positivo poseen uno o dos genesRHD por célula (hemi u homocigotas) mientras que el fenotipo D negativo resulta de laausencia del gen RHD siendo las personas D negativo homocigotas para la deleción delgen RHD. El gen RHCE es el responsable de la expresión de los antígenos CcEe demanera combinada (RHCe, RHce, RHcE y RHCE). Diferentes mecanismos molecularescomo inserciones, deleciones, sustituciones, duplicaciones nucleotídicas y fenómenos deconversión génica pueden alterar la expresión de los antígenos Rh. Las modificacionesgenéticas mencionadas son responsables de más de 500 alelos RH descriptos, asociadosgeneralmente a expresiones débiles, parciales o nulas de dichos antígenos. Las variantesalélicas RHD y RHCE pueden encontrarse asociadas formando haplotipos aberrantes, degran importancia clínica en los estudios de compatibilidad transfusional. Los haplotiposRH aberrantes generan proteínas alteradas que pueden carecer de epitopes de altaincidencia y expresar variaciones cualitativas de los antígenos Rh, siendo los pacientesportadores susceptibles de desarrollar una aloinmunicación postransfusional. El objetivode este trabajo fue analizar los polimorfismos del gen RHCE en donantes de sangreprovenientes de efectores de salud de diferentes regiones del país portadoras de fenotiposD negativos. Se estudiaron 218 muestras de ADN de donantes provenientes de efectoresde salud de Tucumán (n=102), La Plata (n=66), Jujuy (n=16) y el Hospital Garrahan(n=34), anteriormente tipificadas por técnicas serológicas como individuos D negativos.Se obtuvo ADN genómico a través del método de salting-out. En una etapa anterior seconfirmó con estudios de biología molecular la ausencia del gen RHD. En el presentetrabajo se investigó el polimorfismo c.733C/G en el gen RHCE utilizando una reacciónde PCR-SSP. Para confirmar resultados positivos se utilizó una reacción de PCR-RFLP.Por electroforesis capilar se secuenció el exón 5 del gen RHCE. La reacción de PCR SSP733G permitió identificar esta variante en 5 de las 102 muestras (4.90%) provenientes deTucumán, en 1 de las 34 muestras (2.94%) provenientes del Hospital Garrahan. El 100%de las muestras analizadas de La Plata y de Jujuy posee el SNV c.733C en homocigosis.Estos resultados fueron confirmados con PCR-RFLP. Posteriormente, se secuenció elexón 5 del gen RHCE en las muestras portadoras del SNV c.733G. El análisis permitiódetectar solo el polimorfismo c.733G en heterocigosis en las 6 muestras estudiadas.Considerando que la mutación c.733G en el gen RHCE es responsable de la expresión delos antígenos de baja incidencia V y VS, los resultados muestran una frecuencia mayor ala esperada para estos antígenos de baja incidencia. Los donantes portadores de este alelopodrían causar aloinmunización en receptores de sangre.