ESTUDIO DEL POLIMORFISMO MOLECULAR DEL LOCUS RHD EN MUESTRAS CON FENOTIPO D NEGATIVO CE POSITIVO

TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; PRINCIPI, CINTIA; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; MATTALONI, STELLA MARIS; ENSINCK, MARÍA ALEJANDRA; BIONDI, CLAUDIA; COTORRUELO, CARLOS

ROSARIO

Jornada; PRIMERAS JORNADAS DE CIENCIA Y TECNOLOGIA DE LA FBIOyF; 2021

INTRODUCCION: diferentes variantes alélicas RHD son responsables del fenotipo D negativo. Los alelos RHD nulos originan polipéptidos que no expresan epitopes D o no se integran en la membrana eritrocitaria mientras que los alelos DEL codifican proteínas que expresan una escasa cantidad de antígeno D que no es detectada solo por técnicas serológicas especializadas. Estudios moleculares han revelado que los fenotipos Del derivan de diferentes rearreglos genéticos como mutaciones puntuales de cambio de sentido, cambios en los sitios de corte y empalme del ARNm, inserciones y deleciones de nucleótidos en la secuencia codificante del gen RHD. Además, este fenotipo está fuertemente asociado a la expresión concomitante del antígeno C o E. Debido a la dificultad para identificar estos fenotipos en los Bancos de Sangre, la mayoría de los dadores portadores de variantes DEL son tipificados erróneamente como D negativo, con el riesgo de inducir una aloinmunización en receptores D negativo. RESULTADOS: se analizaron 1354 muestras D negativo portadoras de los antígenos C y/o E provenientes de Tucumán, Córdoba, La Plata, Mendoza, CABA y Rosario. Se obtuvo ADN genómico a través del método de salting-out. En todas las muestras se investigó la presencia del gen RHD a través de una estrategia de PCR multiplex que analiza en forma simultánea dos regiones diferentes del gen RHD. Este estudio permitió identificar 229 muestras D negativas portadoras de secuencias génicas RHD específicas (D-/RHD+). En estas muestras se investigó la presencia de alelos nulos y alelos DEL analizando polimorfismos asociados a los 10 exones del gen RHD (escaneo de exones) y utilizando estrategias de PCR SSP desarrolladas en nuestro laboratorio, técnicas de microarreglos de ADN y secuenciación. Este estudio permitió detectar 191 (83,41%) muestras portadoras de alelos nulos y 38 (16,59%) muestras con fenotipo Del, representando estas últimas el 2,81% de individuos D-CE+. Las variantes DEL identificadas a través de los estudios moleculares fueron: RHD*11 (n=6; 15,79%), RHD*DEL43 (n=26; 68,43%), RHD*1248insG (n=1; 2,63%), RHD*D-CE(4-9)-D (n=2; 5,26%), RHD*D-CE(4-7)-D (n=1; 2,63%) y RHD*IVS3+1A (n=2; 5,26%).CONCLUSIONES: la alta incidencia (2,81%) de individuos portadores de alelos DEL en el grupo de muestras D negativo que expresan los antígenos C y/o E revela la importancia de una correcta caracterización de los polimorfismos responsables de una expresión disminuida de los epitopes antigénicos D en dadores de sangre considerados serológicamente D negativo. El conocimiento de las bases moleculares de los alelos DEL asociados a los diferentes grupos étnicos resulta fundamental para desarrollar estrategias de genotipificación en individuos D negativo. Esto evitará la transfusión de unidades Del a pacientes con riesgo de aloinmunización.