Silenciamiento de microRNAs en parásitos cestodes

GRECCO, ANDRES; MACCHIAROLI, NATALIA; CUCHER, MARCELA; ROSENZVIT, MARA

Simposio; XX Simposio Internacional sobre Enfermedades Desatendidas; 2021

Silenciamiento de microRNAs en parásitos cestodesAutores: 1Andrés Grecco, 2Natalia Macchiaroli, 1Marcela Cucher y 1Mara Rosenzvit.Institución: 1Laboratorio Biología Molecular de Hidatidosis, Instituto de Microbiología y Parasitología Médica (IMPaM), Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICET), Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires (UBA), Buenos Aires, Argentina. 2 Laboratorio de Genomica y Bioinformatica de Patogenos,  Instituto de Biociencias, Biotecnologia y Biologia traslacional (ib3), Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA)Contacto: andresgrecco1@gmail.comIntroducciónMesocestoides vogae (syn.M.corti) es un parásito platelminto validado como modelo de laboratorio para el estudio de la clase Cestoda. Esta clase incluye especies como Echinococcus granulosus y Echinococcus multilocularis que causan enfermedades tropicales desatendidas como equinococosis.Los microRNAs (miRNAs) son pequeños ARNs no codificantes. Su rol es fundamental en la regulación de la expresión génica a nivel post-transcripcional reconociendo sitios en el 3’UTR de sus mRNAs blanco e inhibiendo su expresión. miR-71 es un miRNA altamente expresado en parásitos cestodos, ausente en vertebrados y con genes blanco esenciales para la biología parasitaria, por lo que representa un potencial blanco selectivo para el tratamiento de las cestodiasis.En trabajos previos de nuestro grupo se logró silenciar in vitro a miR-71 en cultivos celulares primarios de Echinococcus multilocularis e identificar sus genes blanco. El objetivo de este trabajo es silenciar in vitro a miR-71 en parásitos completos, en particular en tetratiridios (estadío larvario de M. vogae) e identificar sus genes blanco.Materiales y métodosPara llevar a cabo el silenciamiento de miR-71, se eligió una estrategia basada en el uso de antimiRs. Los antimiRs son oligonucleótidos monocatenarios complementarios al miRNA de interés, por lo que al unirse al mismo bloquean su función. Previo al silenciamiento, se realizó la transfección de tetratiridios con concentraciones crecientes de un oligonucleótido fluorescente y la observación al microscopio confocal, a fin de determinar las mejores condiciones para la incorporación de antimiRs. La determinación del silenciamiento de miR-71 se realizó mediante RT-qPCR. La predicción bioinformática de genes blanco de miR-71 en M. vogae se realizó mediante los algoritmos miRanda y RNAhybrid. Se integraron los resultados y se seleccionaron los genes blanco predichos por ambos algoritmos para su análisis funcional in silico.ResultadosMediante la administración de antimiR-71 en concentraciones de 3 y 9 μM a tetratiridios se logró el silenciamiento de miR-71 en porcentajes de 68% y 83% respectivamente. Entre los genes blanco de miR-71 se encontraron factores de transcripción y proteínas relacionadas con el proceso de traducción.ConclusiónActualmente estamos realizando el estudio del efecto del silenciamiento de miR-71 tanto en la viabilidad y el desarrollo parasitario, como en la expresión de los genes blanco predichos. Estos resultados proveen una estrategia para estudiar la función de los miRNAs en parásitos cestodos y para analizar su potencial como blancos de drogas de enfermedades parasitarias desatendidas.