EFECTO DEL ESTRÉS OXIDATIVO EN EL PLEGAMIENTO DEL TUBO CARDIACO

HERRERA-ESTRADA, IDALIA; ARMESTO, RUBINA; CAVIGLIA, AGUSTÍN ; BINOLFI, ANDRES; LOMBARDO, VERÓNICA A.

Rosario

Workshop; 1er encuentro Zebrafish en Red Argentina (ZebRA2023); 2023

ZebRA

El plegamiento del tubo cardiaco es un proceso esencial y altamente conservado en todos los vertebrados. Anomalías en el mismo generan defectos cardíacos congénitos en humanos (1). El aumento en los niveles de las especies reactivas del oxígeno durante el embarazo influye en el desarrollo del embrión, específicamente en el desarrollo cardíaco (2,3). El pez cebra, presenta múltiples ventajas para el estudio de la morfogénesis del corazón, como ser: su embriogénesis externa, la accesibilidad del corazón embrionario, su capacidad de sobrevivir varios días con un corazón anormal (4). El objetivo del presente trabajo es caracterizar el proceso de plegamiento del tubo cardíaco y evaluar el efecto del estrés oxidativo sobre dicho proceso. Para la caracterización del plegamiento del tubo cardíaco registramos periódicamente imágenes in vivo de corazones embrionarios utilizando un microscopio fluorescente en combinación con una línea reportera de pez cebra [Tg(myl7:eGFP)twu34] (5). Del análisis de dichas imágenes calculamos parámetros morfológicos que describen el grado de plegamiento del tubo cardíaco (6), y establecimos nuevos parámetros para describir la posición relativa atrio-ventricular. Durante este periodo de desarrollo, analizamos los cambios fisiológicos asociados al sistema cardiovascular: la frecuencia cardíaca, el flujo sanguíneo y la maduración de los glóbulos rojos. Para evaluar el efecto del estrés oxidativo en el plegamiento del tubo cardíaco los embriones fueron tratados con diferentes agentes oxidantes de efecto agudo o gradual. Al final de los tratamientos, evaluamos in vivo la morfología de los corazones embrionarios bajo un microscopio fluorescente y analizamos los cambios fisiológicos asociados al sistema cardiovascular. De las imágenes obtenidas, medimos los parámetros morfológicos establecidos previamente observando un menor grado de plegamiento del tubo cardíaco en los corazones tratados vs control. Para un análisis detallado del efecto oxidativo sobre los corazones embrionarios obtuvimos imágenes confocales para cuantificar el número de los cardiomiocitos (7), medir parámetros morfológicos adicionales, y evaluar los efectos sobre el canal atrio-ventricular. En el presente trabajo caracterizamos el plegamiento del tubo cardíaco en embriones vivos y determinamos parámetros que describen este proceso y que nos permitieron diseñar un predictor de morfología cardíaca. Finalmente, nuestros resultados muestran que la exposición de los embriones a estrés oxidativo conduce a un anormal plegamiento del tubo cardíaco.Referencias: (1) Ramsdell, Dev Biol, 2005, 288:1-20. (2) Erickson et al., 2008 Cell, 133, 462–474 (3) Hobbs et al., 2005 The American Journal of Clinical Nutrition, 81, 147-153 (4) Bakkers, Cardiovascular Research, 2011, 10.1093/cvr/cvr098. (5) Huang et al., Dev Dyn., 2003, 228, 30-40. (6) Lombardo et al., Development, 2019. (7) Dietrich et al., Dev Cell, 2014, 30:367-377.