CARACTERIZACIÓN DE CÉLULAS STEM AISLADAS DE ADENOMAS HIPOFISARIOS E IMPLICANCIA DE LA SOBREEXPRESIÓN DE SOX2 SOBRE EL METABOLISMO CELULAR

CAROLINA B. GUIDO; FABIOLA VELASQUEZ; PABLO A. PÉREZ; BEATRIZ CAPUTTO; SILVINA GUTIERREZ; JORGE H. MUKDSI; ALICIA I. TORRES

Cordoba

Jornada; XVII Jornada de investigación científica de la Facultad de Ciencias Médicas. UNC; 2016

Facultad de ciencias médicas.

Resultados previos de nuestro laboratorio, han permitido inferir que células hipofisarias que expresan marcadores de células stem (CS) y cancer stem cells (CSC) estarían involucradas en la etapas tempranas del desarrollo tumoral. Además, la sobre-expresión del factor de transcripción Sox2, asociado a CS, estaría vinculada con la formación de tumores. El objetivo de este trabajo fueseleccionar y caracterizar la población de CS que crece en suspensión como esferoides y expresan marcadores específicos a partir de cultivos primarios de tumores hipofisarios experimentales.Además, se propone analizar si la sobreexpresión de Sox2 modifica el Comportamiento de la línea tumoral hipofisaria GH3.Las SC fueron aisladas a partir de cultivos primarios de tumores hipofisarios de ratas hembras Fischer estrogenizadas por 30 días. Las SC fueron cultivadas en condiciones no adherentes que favorecen la formación de estructuras esféricas. Para este fin se utilizó un medio de selección suplementado con EGF, bFGF y B27. Las células GH3 fueron transducidas con un vector retroviral que expresa Sox2 y GFP. Se realizó inmunofluorescencia para la detección de marcadores asociadosa CS y CSC: GFRa2, Sox2, Oct4, Nestin, CD133 y CD44 y el análisis morfológico ultraestructural en ambos modelos tumorales. El metabolismo y la viabilidad celular de GH3 se determinaron por el ensayo de AlamarBlue, y proliferación mediante la incorporación de timidina tritiada.Las pituesferas obtenidas fueron positivas para los marcadores antes mencionados y luego de la diferenciación con medio suplementado, expresaron S100, vimentina y GFAP. La sobre-expresión de Sox2 en células GH3 indujo cambios ultraestructurales indicativos de un fenotipo celular más indiferenciado.También se observó un incremento en el número de figuras mitóticas, en la capacidad de formar esferoides y en el metabolismo y la viabilidad celular con respecto a las GH3 control.Estos resultados muestran que las CS forman parte de la masa tumoral hipofisaria y que el factor de transcripción Sox2, induce un fenotipo celular más indiferenciado, lo cual sugiere un rol activo en la tumorogénesis hipofisaria.