AVANCES EN LA PRUEBA DE UN TEST MOLECULAR SIMPLIFICADO PARA LA PESQUISA NEONATAL DEL CHAGAS CONGÉNITO

STOLOWICS FG; L. LAROCCA; TERRONES C; DIMA E; SMUTHIUS F; MACALLINI G; ARANDA C; ONETO A; VOJNOV A; CARRILLO C

Jornada; LII JORNADAS CIENTIFICAS ANUALES del HOSPITAL ?Dr. Carlos G. Durand.; 2016

p { margin-bottom: 0.1in; direction: ltr; color: rgb(0, 0, 0); line-height: 120%; }p.western { font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 11pt; }p.cjk { font-family: "Times New Roman",serif; font-size: 11pt; }p.ctl { font-family: "Times New Roman",serif; font-size: 11pt; }AVANCESEN LA PRUEBA DE UN TEST MOLECULAR SIMPLIFICADO PARALA PESQUISA NEONATAL DEL CHAGAS CONGÉNITO**StolowiczF, **Larocca L, Terrones C., Dima E, Smithius F, Macallini G, ArandaC, Vojnov A, Oneto A, Carrillo C. (**Contribución igualitaria).DivisiónLaboratorio, Hospital Gral.de Agudos C.G. Durand & Instituto deCiencias y Tecnología C. Milstein - CONICET.INTRODUCCIÓN:El Chagas es una endemia causada por el Trypanosomacruzi.La transmisión vertical, cuya tasa se describe entre el 1% y el 15%según distintos trabajos, es la única vía que no puede prevenirse.En Argentina, se estima que nacen anualmente ~1.200 niños/as conChagas congénito. El diagnóstico precoz asegura el éxito deltratamiento.OBJETIVO:Se ha desarrollado un test para la detección del Chagas congénito,basado en la tecnología de amplificación molecular isotérmica(AMI), que se adapta a las prácticas de laboratorio en reciénnacidos (RN). En este trabajo se probó el test con muestras depesquisa, iniciando el estudio clínico de sensibilidad,especificidad y variables operativas.MATERIALESY MÉTODOS:se utilizaron muestras remanentes de la pesquisa neonatal (gota secaen papel), en formato de círculos de 5mm de diámetro, de dospoblaciones: *GRUPOA:RN cuyas madres son portadoras de la infección; *GRUPOB:RN cuyas madres no están infectadas para Chagas. Se utilizaroncontroles negativos (sangre certificada negativa y papel sin siembra)y un control positivo (sangre artificialmente inoculada con elparásito). La reacción AMI se realizó en 4 pasos: i- toma demuestra; ii- mezcla de muestra y reactivos; iii- incubación a 65ºC-40min; iv- revelado por cromatografía en ?lateralflow dipsticks?(LFD) (tiras tipo test doméstico de embarazo). Los resultados secompararon con los obtenidos por los métodos de referencia (M.Ref.):Parasitemia a 0 - 3 meses y serología luego de los 10 meses de edad.RESULTADOS:Se realizaron 134 reacciones de AMI, 35 de las cuales pudieroncompararse con resultados obtenidos por M.Ref. MUESTRASDEL GRUPO A:EnsayoI -10 muestras: encontramos 60% de concordancia entre M.Ref. y AMI(estos positivos), comprobando que existe contaminación cruzadaentre tarjetas cuando están físicamente en contacto. EnsayoII -10 muestras con resultados sólo de parasitemia como M.Ref.: AMImostró una concordancia del 70%; EnsayoIII -15 muestras con resultados de serología: concordancia de AMI del86.7%. MUESTRASDEL GRUPO B:EnsayoIV -45 reacciones: se obtuvo con AMI un resultado positivo y unoindeterminado, indicando una concordancia del 95,5%.CONCLUSIONES:El método AMI, además de ser extremadamente sencillo de aplicar,presentó una sensibilidad notablemente mayor a la parasitemia ysimilar- o levemente mayor- a la serología. Puesto que el número demuestras ensayadas es todavía pequeño no podemos descartar que hayacasos de falsos positivos de AMI ni obtener una tabla de contingenciacon valor estadístico. Hasta aquí, AMI parece resultar un métodode detección con alta sensibilidad, simple y temprano (se realiza almomento de nacer) para la pesquisa de Chagas congénito. Puesto quela trazabilidad de las muestras resultó operativamente difícil, seplanea continuar con el estudio, para alcanzar valores estadísticos.