Preparación de superficies sensoras adecuadas para inmunosensores por Resonancia de Plasmones Superficiales

C.Y. CHAIN; M. A.DAZA MILLONE; EDUARDO A. RAMIREZ; ROMANIN, D.; A. CRIVARO; R. C. SALVAREZZA; M. RUMBO; G. DOCENA; M. E. VELA

La Plata-Argentina

Congreso; 8vo Congreso Argentino de Química Analítica; 2015

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

La detección basada en la Resonancia de Plasmones Superficiales (SPR) constituye un método prometedor en el área de los biosensores permitiendo la detección directa (?libre de sondas?) de los analitos de interés, reduciendo el consumo de reactivos y el tiempo de análisis. Estos biosensores pueden medir eficientemente los eventos de unión a la superficie a través de los cambios en el índice de refracción [1]. En las medidas de SPR es imprescindible minimizar los efectos de la adsorción inespecífica. Los sustratos comerciales más comúnmente empleados son superficies de oro recubiertas con carboximetildextrano, que si bien provee un entorno favorable para la mayoría de las interacciones biomoleculares tiene alto costo y una incontrolable adsorción inespecífica [2]. El objetivo de este trabajo es preparar superficies sensoras a partir de la modificación superficial de sustratos de oro para la detección y cuantificación de anticuerpos mediante un equipo comercial de SPR Navi 200TM. Con dicho fin, los sustratos se funcionalizaron ex situ con monocapas de alcanotioles autoensambladas simples (ácido 11-mercaptoundecanoico(MUA)) y mixtas (mezclas de MUA con ditiotreitol(DTT)) que es de menor longitud y sin el grupo funcional reactivo para la síntesis amida. Sobre el grupo carboxilo del tiol se inmovilizó covalentemente, dentro del equipo SPR, al ligando (antígeno). Las superficies sensoras así preparadas fueron utilizadas para realizar medidas SPR de la interacción antígeno/ anticuerpo para el sistema 2,4 dinitrofenol (DNP)/antiDNP al hacer fluir sobre ellas concentraciones crecientes de anticuerpos monoclonales en solución. La respuesta de estas superficies se evaluó en términos de la sensibilidad y rango de detección SPR de los analitos de interés. La sensibilidad de los ensayos realizados con sustratos modificados con monocapas mixtas fueron significativamente mejores respecto de las monocapas simples con MUA(Fig.1). En ambas superficies no se observó adsorción inespecífica de seroalbúmina bovina usada como control.